[发明专利]用于诊断膀胱癌的方法

权利要求书

1.至少一种甲基化敏感性限制性内切核酸酶和用于扩增对照基因座和至少一种限制性基因座的引物对在制备用于鉴定人受试者中的膀胱癌的试剂盒中的用途，所述至少一种限制性基因座包括SEQ ID NO:1中列出的基因座，当所述试剂盒被使用时，包括以下步骤：

(a)将来自从所述人受试者获得的尿样品的DNA应用于用所述至少一种甲基化敏感性限制性内切核酸酶的消化，以获得限制性内切核酸酶处理的DNA；

(b)从所述限制性内切核酸酶处理的DNA共扩增包括SEQ ID NO:1中列出的基因座的所述至少一种限制性基因座和所述对照基因座，从而生成每种基因座的扩增产物；

(c)计算所述至少一种限制性基因座的每一种和所述对照基因座的扩增产物的信号强度之间的比率；以及

(d)将所计算的比率与在源自已知来源的多于一个DNA样品中确定的一种或更多种参考比率比较，所述已知来源选自健康受试者和膀胱癌患者，并且基于所述比较，将测试的样品鉴定为源自膀胱癌患者或者源自健康受试者，从而鉴定所述人受试者中的膀胱癌。

2.如权利要求1所述的用途，其中所述至少一种限制性基因座还包括SEQ ID NO:5中列出的基因座。

3.如权利要求2所述的用途，其中所述至少一种限制性基因座还包括SEQ ID NO:7中列出的基因座和SEQ ID NO:11中列出的基因座。

4.如权利要求3所述的用途，其中所述至少一种限制性基因座还包括选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15中列出的基因座的组的至少一种另外的限制性基因座。

5.如权利要求4所述的用途，其中所述至少一种另外的限制性基因座包括SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15中列出的基因座。

6.如权利要求1所述的用途，当所述试剂盒被使用时，还包括以下步骤：

提供第一对照构建体和第二对照构建体，所述第一对照构建体和所述第二对照构建体包含非人DNA序列，其中所述第一对照构建体包含缺乏所述甲基化敏感性限制性内切核酸酶的识别序列的DNA序列，并且所述第二对照构建体包含含有所述甲基化敏感性限制性内切核酸酶的识别序列并且完全未被甲基化的DNA序列；

用所述甲基化敏感性限制性内切核酸酶消化所述第一对照构建体和所述第二对照构建体；以及

扩增所述第一对照构建体和所述第二对照构建体；

其中所述第一对照构建体的充分扩增伴随所述第二对照构建体的低扩增或不扩增的检测结果指示适当的DNA消化。

7.如权利要求1所述的用途，其中步骤(a)使用一种甲基化敏感性限制性内切核酸酶进行。

8.如权利要求7所述的用途，其中所述甲基化敏感性限制性内切核酸酶为HhaI；或其中所述甲基化敏感性限制性内切核酸酶为HinP1I。

9.如权利要求1所述的用途，其中所述对照基因座是缺乏所述甲基化敏感性限制性内切核酸酶的识别序列的基因座。

10.如权利要求9所述的用途，其中所述对照基因座是SEQ ID NO:16中列出的基因座。

11.如权利要求1所述的用途，其中步骤(b)利用实时PCR进行。