[发明专利]克隆并进一步纯化以制备重组静脉注射免疫球蛋白的方法

权利要求书

1.一种克隆并纯化重组静脉注射免疫球蛋白(IVIG)的方法，包括以下步骤：

a)克隆人免疫球蛋白靶基因；

b)体外筛选表达该人免疫球蛋白靶基因的酵母细胞以产生酵母细胞系；

c)将该酵母细胞系发酵并收集所得到的培养基；

d)用10CP+90SP过滤该培养基；

e)进行弱阴离子交换层析以收集流通溶液；

f)对该流通溶液进行超滤以达到所需的蛋白质浓度；

g)对该流通溶液进行无菌过滤；

h)用20nm过滤器对该流通溶液进行纳米过滤以去除病毒；和

i)填装并在低pH下温育该流通溶液进行病毒灭活以获得纯化的重组IVIG。

2.权利要求1的方法，其中所得的纯化的重组IVIG包含蛋白质KH 33、KH 34、KH 35、KH 36和KH 37。

3.权利要求1的方法，其中该人免疫球蛋白靶基因在血浆来源的IVIG中被发现并测序。

4.权利要求1的方法，还包括将IVIG基因序列转染到酵母细胞系中以获得表达IVIG的酵母细胞系，并用双重抗生素标记筛选表达IVIG的酵母细胞系。

5.权利要求4的方法，其中表达IVIG的酵母细胞系在生物反应器中扩增和培养以使细胞数目最大化至每毫升至少50亿个细胞。

6.权利要求1的方法，其中该弱阴离子交换层析是DEAE琼脂糖凝胶FF。

7.权利要求1的方法，其中对该流通溶液用10K截止膜进行超滤。

8.权利要求1的方法，还包括调节该流通溶液的蛋白质浓度和pH。

9.权利要求1的方法，其中该无菌过滤是0.22μm无菌过滤。

10.权利要求1的方法，其中将该流通溶液填装并在25℃下以pH 4进行低pH孵育21天作为病毒灭活。

11.一种阻止乙型肝炎病毒在患者体内复制的方法，包括用权利要求1的方法获得的纯化的重组IVIG对有此需要的患者进行给药。

12.一种杀死患者体内的乙型肝炎病毒的方法，包括用权利要求1的方法获得的纯化的重组IVIG对有此需要的患者进行给药。

13.一种预防患者体内感染乙型肝炎病毒的方法，包括用权利要求1的方法获得的纯化的重组IVIG对有此需要的患者进行给药。

14.一种预防患者体内感染H1N1和其他禽流感病毒中的一种或多种的方法，包括用权利要求1的方法获得的纯化的重组IVIG对有此需要的患者进行给药。

15.根据权利要求1的方法生产的纯化的重组IVIG。

16.一种治疗有此需要的患者的方法，包括用权利要求1的方法获得的纯化的重组IVIG对患者进行给药，

其中纯化的重组IVIG将受损的和有病的细胞转化或修复成健康的细胞，

其中纯化的重组IVIG保护细胞改变，

其中纯化的重组IVIG向身体发送信号以产生健康的新细胞，从而防止新细胞受细胞内和细胞外损伤信号的影响。

17.权利要求1的纯化的重组IVIG，其中该纯化的重组IVIG为液体形式。

18.权利要求1的纯化的重组IVIG，其中该纯化的重组IVIG为冻干形式。