[发明专利]用免疫和化学方法快速简便测定S-腺苷蛋氨酸，S-腺苷同型半胱氨酸和同型半胱氨酸

说明书

本发明提供免疫层析试纸条，均相与非均相免疫测定方法和系统或试剂盒用于检测和定量样品中S‑腺苷甲硫氨酸(SAM)，S‑腺苷高半胱氨酸(SAH)和同型半胱氨酸(HCy)的方法，包括：(a)制备荧光团和抗体的偶联物；(b)将SAM，SAH和HCY固定在固相支持物上；(c)提供样品，将所述样品加入抗SAM，抗SAH或抗‑HCy与镧系元素螯合物或量子点(QD)的偶联物上，结合后形成包含所述偶联物，在固体支持物上SAM，SAH或HCy，和可能存在于样品中的SAM，SAH或HCy的竞争性复合物；和(d)通过监测由复合物中的荧光共轭物介导的光谱发射来检测复合物的存在(如果存在)，其中荧光信号的出现和数量反映样品中SAM，SAH或HCy的存在和数量。

本发明专利申请延续临时美国专利US62/166,044题目为”用免疫和化学方法快速简便测定S-腺苷蛋氨酸，S-腺苷同型半胱氨酸和同型半胱氨酸”，提交日期为2015年5月25日。本专利申请将包括上述临时专利申请的全部内容。

发明领域

本发明涉及在S-腺苷甲硫(蛋)氨酸(SAM)，S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)和C-反应蛋白(CRP)的免疫测定中使用荧光材料如量子点，荧光镧系元素金属螯合物和胶体微球。本发明还涉及光化学方法用于测定同型半胱氨酸(HCy)的干试纸条方法和两种方法的组合。本发明还涉及使用同时读取免疫荧光和光化学颜色的荧光光密度装置，以便快速方便地报告结果，来定量SAM，SAH和HCy。本发明还涉及临床样品的测定。

本发明还涉及检测液体样本中的分析物的存在或浓度的荧光化合物指示剂分子以及用于实现这种检测的方法。更具体地说，本发明涉及荧光镧系元素金属螯合物及其作为指示剂分子的用途，用于检测介质，包括液体介质如生物液体样本或其它生物样本中的SAM，SAH和CRP等分析物的存在或浓度。

本发明还涉及开发检测心血管危险因素的多种分析物，用于预测冠心病和中风的测定系统。本发明还涉及SAM和SAH，HCy和CRP的测定以确定心脏保健和心脏预后。本发明在体外诊断(IVD)和POCT领域也特别有用。

发明的背景

在生物学中，用荧光材料标记诸如细胞或病毒的结构是有意义的，用于准确鉴定，易于检测和显微分析。传统的有机染料荧光团有很多优势，人们可以对一系列荧光材料进行修饰，通过已知或可预知的亲和力和化学特性，使之能够靶向性地结合到广泛的生物结构上。当染料与目标生物材料结合时，使用给定波长的光来激发染料，会产生该有机荧光染料特异的荧光信号。然而，当用于标记生物材料时，传统的有机染料具有许多限制。

半导体荧光纳米晶体(“量子点”)是纳米大小的半导体，发光晶体，形状为球形，具有比有机染料优异的荧光性能。量子点通常由周期表中的II-VI族(例如CdSe，CdTe，CdS和ZnSe)或III-V族(例如InP和InAs)元素合成，在外层可以包裹许多壳，层或分子，以使之具有的一定的物理性质如表面官能化。量子点在生物学中的应用已经取得了突破，高度发光的量子点可以使用表面修饰技术如二氧化硅/硅氧烷涂层或直接吸附双功能体，使其变成水溶性且随后具有生物相容性，这为生物学提供了有用的工具。量子点作为新的生物标记分子，其应用和性质优于传统荧光蛋白和有机染料。

传统有机染料的主要局限性是吸收和发射光谱的能力非常有限。第一个缺点是有机染料的峰值发射不能改变-每种染料天然地对应于不同的发射波长或荧光颜色的不同分子。第二个缺点是有机染料吸收谱很窄-染料虽有显示吸收峰，但是这些吸收峰并不总是在光谱的方便区域，使得激发有机染料具有挑战性和昂贵性。第三个缺点是不均匀的吸收和发射峰-有机染料在其发射和吸收峰的几何形状中具有产生“肩”的趋势，这个主要缺点无法使需要高斯型发射谱的应用正常实施。另一个缺点是稳定性-有机染料的使用寿命相对于其它标记机制的寿命通常较低，而有机染料荧光完全由每个染料的分子键合性质控制。最后，由有机染料分子吸收的入射光辐射使电子进入激发态，于是它们衰变并释放光辐射。这种发射不能改变，因为它对应于每种类型分子固有的染料分子的预先设定的激发态。