[发明专利]使用合成转录因子的核重编程方法

权利要求书

1.一种核重编程哺乳动物体细胞的方法，所述方法包括：使哺乳动物体细胞的群与激活多潜能因子基因表达的合成转录因子在足以将所述哺乳动物体细胞重编程为诱导型多潜能干细胞(iPSC)的条件和时间段下接触。

2.一种核重编程哺乳动物体细胞的方法，所述方法包括：使哺乳动物体细胞的群与激活多潜能因子基因表达的合成转录因子在足以将所述哺乳动物体细胞转分化为与所述哺乳动物体细胞的细胞类型不同的靶细胞的条件和时间段下接触。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物体细胞是人细胞。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物体细胞是成纤维细胞。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物体细胞是原代血细胞。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述血细胞是外周血单核细胞(PBMC)或脐带血单核细胞。

7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述合成转录因子包含：

(a)包含DNA结合区段和多肽结合区段的至少一种引导RNA，其中所述DNA结合区段结合多潜能因子基因的启动子区域；和

(b)至少一种转录调节剂，其结合所述引导RNA的所述多肽结合区段。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述多潜能因子基因选自oct3/4、sox2、klif、c-myc、lin28、nanog、glis-1、bcl2和bclx。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述多潜能因子基因选自oct3/4、sox2、klif、c-myc、lin28和nanog。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述多潜能因子基因是oct3/4。

11.如权利要求7至10中任一项所述的方法，其中所述转录调节剂包含酶促失活的Cas9多肽(dCas9)。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述dCas9与转录激活结构域融合。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述转录激活结构域是VP64或p65。

14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括使所述哺乳动物体细胞的群与阻抑第二多潜能因子基因表达的第二合成转录因子接触。

15.如权利要求14所述的方法，其中被抑制的第二多潜能因子基因选自p19^Arf、p16^Ink4a、ROCK、PKA/PKG/PKC家族激酶基因，以及当被阻抑时抑制mTOR途径的基因。

16.如权利要求14或15所述的方法，其中所述第二合成转录因子包含第二转录调节剂，所述第二转录调节剂包含与转录抑制子结构域融合的dCas9。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述转录抑制子结构域是KRAB。

18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物体细胞的群与编码所述合成转录因子的至少一个表达载体接触。

19.如权利要求18所述的方法，其中所述表达载体是非病毒的附加型载体。

20.如权利要求18或19所述的方法，其中所述哺乳动物体细胞的群与编码所述引导RNA和所述转录调节剂二者的表达载体接触。

21.如权利要求18或19所述的方法，其中所述哺乳动物体细胞的群与编码所述引导RNA的第一表达载体和编码所述转录调节剂的第二表达载体接触。

22.如权利要求7至17中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物体细胞的群与转录调节剂多肽接触。

23.如权利要求22所述的方法，其中所述哺乳动物体细胞的群与转录调节剂多肽接触，并进一步与分离的gRNA核酸接触。

24.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物体细胞的群与至少三种合成转录因子接触，每种靶向不同的基因。