[发明专利]与膜结合蛋白质结合的橡胶颗粒的制造方法，充气轮胎的制造方法和橡胶制品的制造方法

说明书

本发明提供了通过无细胞蛋白质合成来制造与膜结合蛋白质结合的橡胶颗粒的方法。本发明涉及一种制造与膜结合蛋白质结合的橡胶颗粒的方法，该方法包括如下步骤：在橡胶颗粒和含有对膜结合蛋白质进行编码的mRNA的无细胞蛋白质合成溶液存在下进行蛋白质合成以将膜结合蛋白质结合到橡胶颗粒上。

技术领域

本发明涉及与膜结合蛋白质结合的橡胶颗粒的制造方法，充气轮胎的制造方法以及橡胶制品的制造方法。

背景技术

制备膜结合蛋白质的常规方法需要培养大量的过量表达膜结合蛋白质的细胞(例如大肠杆菌，酵母)，用表面活性剂提取膜结合蛋白质，并纯化提取的蛋白质。然而，用于提取膜结合蛋白质的最佳表面活性剂根据不同蛋白质而不同，并且合适的表面活性剂的选择在膜结合蛋白质的制备中是重要的。

由于其疏水性，膜结合蛋白质甚至难以纯化。此外，一旦它们被表面活性剂溶解，它们的结构发生改变，因此当再次结合到膜上时，蛋白质并不总是保持其原始结构。

为了揭示膜结合蛋白质的真正功能和活性，有必要评估当蛋白质结合膜时，具有适当结构的蛋白质的功能。然而，由于上述原因，这种评估在技术上被认为是困难的。

最近，已经尝试通过无细胞蛋白质合成制造膜结合蛋白质来合成和收集保留其生物学功能(即天然状态)的膜蛋白质，而不是在培养的细胞中制造膜结合蛋白质，并允许蛋白质用脂质体(人造膜)代替细胞膜(参见例如专利文献1)。还公开了：其中通过无细胞蛋白质合成来合成膜结合蛋白质，并且通过将产生的膜结合蛋白质嵌入被固定在基板上的脂质双层中来固定所产生的膜结合蛋白质的方法；和在膜囊泡存在下通过无细胞蛋白质合成实现膜结合蛋白质的高产率合成(参见例如专利文献2和3)。

引用列表

专利文献

专利文献1：JP 2005-225796 A

专利文献2：JP 2010-132594 A

专利文献3：JP 5383197B

发明内容

技术问题

如上所述，已经研究了在脂质体，脂质双层或膜囊泡存在下的膜结合蛋白质的无细胞蛋白质合成。脂质体是人工产生的由磷脂，甘油糖脂，胆固醇或其他组分形成的脂质双层膜。因此，没有蛋白质与生成的脂质体的表面结合。

相比之下，虽然从产胶植物的胶乳中收集的橡胶颗粒也涂覆有脂质膜，但是该橡胶颗粒的膜是天然衍生的膜，其中在植物中合成的蛋白质已经结合到膜的表面。橡胶颗粒的脂质膜通常被认为是单层的。

在上述情况下，还没有尝试在橡胶颗粒存在下进行膜结合蛋白质的无细胞蛋白质合成。

本发明旨在解决上述问题，提供一种通过无细胞蛋白质合成来制造与膜结合蛋白质结合的橡胶颗粒的方法。

解决技术问题的方案

本发明涉及一种制造与膜结合蛋白质结合的橡胶颗粒的方法，该方法包括如下步骤：在橡胶颗粒和含有对膜结合蛋白质进行编码的mRNA的无细胞蛋白质合成溶液的存在下进行蛋白质合成以将膜结合蛋白质结合到橡胶颗粒。

优选地，无细胞蛋白质合成溶液含有胚芽提取物。

优选地，胚芽提取物衍生自小麦。

优选地，橡胶颗粒以5～50g/L的浓度存在于无细胞蛋白质合成溶液中。

优选地，橡胶颗粒在与无细胞蛋白质合成溶液组合之前，用表面活性剂洗涤橡胶颗粒。

优选地，表面活性剂是两性表面活性剂，橡胶颗粒用表面活性剂以在表面活性剂的临界胶束浓度的三倍内的浓度洗涤。

优选地，表面活性剂是CHAPS。