[发明专利]用于肽环化和蛋白酶处理的方法和组合物

权利要求书

1.一种产生肽微阵列的方法，所述肽微阵列包含：

（a）至少一个包含至少一种式I的环状肽的环状肽亚阵列

其中每个R¹、R²、R³和R⁴独立地是天然氨基酸侧链或非天然氨基酸侧链；

每个R⁵和R⁶独立地是氢或N末端封端基团；

每个R⁷独立地是-OH或C末端封端基团；

Q选自羰基、天然氨基酸侧链和非天然氨基酸侧链；

每个X和Y独立地选自键、与Z共价连接的天然氨基酸侧链和与Z共价连接的非天然氨基酸侧链；

Z是包含选自酰胺键、二硫键、异肽键、1,2,3-三唑和任选取代的1,2-醌的部分的基团；

L'和L''各自独立地是任选的二价连接基团或键；

m是0至6的整数；

n是0至6的整数；

p是1至100的整数；

q是0或1；

r是0或1；

t是0至100的整数；

u是0或1；且*是连接至少一种环状肽与具有反应性表面的固体支持物的连接点；

（b）至少一个包含至少一种式IIa的线性肽的线性肽亚阵列

IIa

其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R₇、Q、L'、L''、m、n、p、q、r、t、u和*如对于式I所定义；

并且X’、Y’、Z'和Z''如对于式II所定义；所述方法包括

（i）使式II的官能化肽在引起Z形成的条件下反应并且在与不能环化的线性肽混合的所述至少一个环状肽亚阵列中提供所述至少一种式I的环状肽，

其中R¹、R² 、R³、R⁴、R⁵、R⁶、Q、L'、L''、m、n、p、q、r、t、u和*如对于式I所定义；

每个R⁷独立地选自-OH、C末端封端基团和；

每个R⁸独立地是天然氨基酸侧链或非天然氨基酸侧链；

每个R⁹独立地是-OH或C末端封端基团；

每个X'独立地选自键、与Z''共价连接的天然氨基酸侧链和与Z''共价连接的非天然氨基酸侧链；

每个Y'独立地选自键、与Z'共价连接的天然氨基酸侧链和与Z'共价连接的非天然氨基酸侧链；

Z'和Z''各自独立地选自键、-OH、氢、硫醇、胺、羧酸、酰胺、炔、叠氮化物、任选取代的氨基苯酚、天然氨基酸侧链、非天然氨基酸侧链、N末端保护基和C末端保护基，条件是Z'和Z''是组合形成Z的互补基团；

b是0至50的整数；

且***是与所述官能化肽的其余部分的连接点；

（ii）将所述肽微阵列与包含靶蛋白的目标靶标温育；

（iii）测量所述至少一个环状肽亚阵列的肽和所述至少一个线性肽亚阵列的肽与所述靶蛋白的结合特性，以测量包含相同氨基酸序列的线性肽和环状肽之间的差异；和

（iv）鉴定不能环化或不具有对相应线性肽的构象偏好的肽;

其中：所述至少一种式I的环状肽和所述至少一种式IIa的线性肽被固定至所述反应性表面，

所示至少一种式II的官能化肽和所述至少一种式IIa的线性肽结构相同。

2.权利要求1的方法，其中Z包含肽键，Z'包含C末端保护基团或Z''包含N末端保护基团，Q是羰基，q是0，r是1，且u是0。

3.权利要求1的方法，其中p是1至20的整数，q是0，r是1，t是0，u是0，Q是羰基，且Z是酰胺键。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述肽微阵列使用无掩模光引导的微阵列合成制备。