[发明专利]新抗微生物肽、它们的变体和用途

说明书

本发明涉及新型抗微生物肽及其变体。本发明还涉及杀死微生物或抑制微生物生长的方法以及本文公开的肽作为药物、饲料添加剂、防腐剂或表面活性剂的用途。

发明领域

本发明涉及抗微生物肽或其变体，涉及杀死微生物或抑制微生物生长的方法，以及涉及本文所述的肽作为药物、饲料添加剂、防腐剂或表面活性剂的用途。

背景技术

在药物化合物中，抗生素对人类的期望寿命产生了巨大的影响。然而，微生物发展抗性的能力几乎是无限的。多药耐药性已经成为许多人类病原体的一个非常普遍和危险的特征，并且耐药性正在全球蔓延。

内寄生菌是广泛的次级代谢产物的有希望的生产者，在生物医学、制药和医疗行业具有潜在的应用。典型地用于研究内寄生菌的功能多样性的方法学是基于强调快速生长的菌株的分离，因此不代表完整的生物多样性。诸如变性梯度凝胶电泳(DGGE)、限制性片段长度多态性(RFLP)或克隆和直接测序的方法用于分析植物中不可培养的真菌菌落的多样性，但是这样的方法不适于功能研究。内寄生菌的常见问题是，它们在体外仅在某段时间产生代谢产物，然后变得无活性，失去生存力或产生生物活性次级代谢产物的能力。对其它微生物的这种培养问题早已成为开发新方法的驱动力之一以获取巨大微生物财富。

抗微生物肽(AMP)在所有复杂的生物体中都通过先天免疫系统在进化上被保存和产生。它们在人类和哺乳动物中作为第一道防线。AMP是由10-50个氨基酸构成的多肽，具有≥30％的疏水比率和正电荷。通常，AMP对细菌、真菌和酵母具有广谱的抗微生物活性。

WO 2011/113999公开了来自岩高兰(Empetrum nigrum)的内寄生菌的胰蛋白酶多肽以及获得它们的方法。基于经由计算机(in silico)的分析，预测所述肽具有抗微生物活性。

迫切需要对各种病原微生物具有活性的新分子。如下所解释的，本发明满足了这些需求。

发明概述

岩高兰(Crowberry)(Empetrum nigrum)是生长在北半球的多年生灌木，其传统上已经用于治疗传染性疾病并且被认为是这种研究的好的候选者。本发明提供了来源于岩高兰的内寄生菌的新型抗微生物(多)肽及其变体，其对各种微生物具有改善的活性。

本发明的第一方面是提供抗微生物肽或其变体。根据本发明，所述多肽包含SEQID NO:5或与SEQ ID NO:5具有至少37％的同一性。

本发明的第二方面是杀死微生物或抑制微生物生长的方法。根据本发明，所述方法包括用本文所述的肽或其变体处理所述微生物的步骤。

本发明的第三方面是本文所述的肽或其变体作为药物、饲料添加剂、防腐剂或表面活性剂的用途。

本发明获得了相当多的优点。已知AMP对广谱的微生物(包括真菌以及革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌二者)具有活性。由于生产成本最小，所以小AMP易于合成并具有商业可行性。未发现AMP在细菌中发展耐药性。本发明涉及新型抗微生物肽，它们的变体和在各种应用中的用途。

附图简述

图1.琼脂覆层测定，其显示在基于大肠杆菌的内寄生菌宏基因组文库中鉴定的对金黄色葡萄球菌(S.aureus)具有抗细菌活性的亚克隆(a)和不具有活性的亚克隆(s)。

图2.岩高兰宏基因组抗细菌蛋白1的预测氨基酸序列。预测蛋白具有549个残基。高度保守的PPR序列(三角状五肽(pentatricopeptide)重复)是加下划线的。

图3.合成肽Met1-Met12(各100μg)的代表性径向扩散测定(RDA)，针对大肠杆菌(A)和金黄色葡萄球菌(B)测试，NC＝阴性对照，庆大霉素为10μg。

图4a显示由SEQ ID NO:4定义的“Met10”-肽(链100)的25个变体的比对。