[发明专利]通过直接重编程由引入Oct4的人体细胞诱导少突胶质细胞前体细胞的方法

说明书

本发明涉及一种通过直接重编程由其中引入有编码Oct4蛋白的核酸分子的人体细胞或用Oct4蛋白处理的人体细胞诱导少突胶质细胞前体细胞的方法。用低分子量物质处理Oct4过表达人体细胞诱导少突胶质细胞前体细胞的方法可以通过不经由神经干细胞而直接重编程在短时间内高效地建立少突胶质细胞前体细胞，因此少突胶质细胞前体细胞作为治疗难治性脱髓鞘疾病的细胞治疗剂是有用的。

技术领域

本发明涉及一种通过直接重编程由其中引入有编码Oct4蛋白的核酸分子的人体细胞或Oct4蛋白处理的人体细胞诱导少突胶质细胞前体细胞(OPC)的方法。

背景技术

由于老龄化社会的发展，用于更健康老化和无疾病健康生活的个性化细胞治疗剂是改善生活质量所必需的药物。被认为是中枢神经系统疾病的多发性硬化症是原因不明的脱髓鞘疾病，并且在严重情况下伴有感觉和运动损伤。然而，除了用药物治疗减轻症状外，没有基本的治疗方法。因此，能够分化为能产生髓鞘的少突胶质细胞的OPC的移植已经作为主要治疗方法受到了关注，对使用胚胎干细胞和成体干细胞获得将用于移植的细胞的研究正在进行。

胚胎干细胞是多能细胞，与体细胞不同，其能够分化成具有无限分裂能力的所有类型的人类细胞。成体干细胞是能够从患者中提取的多能细胞，作为代表性实例，神经干细胞(NSC)是众所周知的。作为成体干细胞的NSC可以克服神经疾病治疗中的免疫排斥反应，因此作为细胞治疗剂受到关注。然而，由于NSC分化成少突胶质细胞的能力相当低因此是低效的，并且由于它们应该从患者自身的脑组织获得因此在细胞数量方面受到限制。胚胎干细胞在临床应用上也有缺点需要克服。首先，存在道德问题，因为需要破坏受精胚胎以获得胚胎干细胞，并且当将从胚胎干细胞分化的细胞移植到患者中时，发生免疫排斥。

在试图克服这些问题的各种方法中，从分化细胞去分化为未分化细胞的方法已受到关注，并且去分化包括使用分化细胞产生多能干细胞如胚胎干细胞。2006年，日本ShinyaYamanaka教授通过基因引入研发了诱导性多能干细胞(iPS细胞)后，将这些细胞应用于治疗剂的各种研究正在进行。

在当将四种基因(去分化诱导因子；Oct4，Sox2，c-Myc和Klf4)引入小鼠或人体细胞中然后在胚胎干细胞培养条件下长时间培养时(Cell126:663-676,2006；Science 318:1917-1920,2007)建立了与胚胎干细胞具有相似特性的干细胞的报道被提出之后，各种能够用于临床应用的替代基因的方法已被研究。然而，由于对人体细胞研究结果仍然不足，难以确定去分化诱导机制以及形成畸胎瘤的风险，因此将iPS细胞应用于临床试验是困难的。直接重编程方法是最近已经提出作为这样的iPS细胞的替代方法，并且包括两种类型的技术，通过生长信号的调节由去分化诱导因子和低分子量物质的组合在非多能性阶段用于引入在细胞中特异性表达的基因并将细胞诱导为所需的细胞。这种方法被高度赞赏，因为它仅具有各种干细胞的优点，并消除了许多抑制临床应用的因素。

近年来，美国的Marius Wernig研究小组使用三种基因(Olig2、Sox10、Zfp536)和Paul J Tesar研究小组使用三种基因(Olig2、Sox10、NKX6.2)显示了建立小鼠OPC的可能性，并且据报道，他们成功地从小鼠体细胞直接重编程到OPC。然而，目前还没有使用人体细胞的报道。另外，美国的Shengding和Mickie Bhatia研究小组通过将Oct4基因引入人体细胞直接重编程来证明了神经干细胞的建立，因此提出了Oct4基因可以调控神经系统相关基因在细胞中的表达的新范例。

因此，本发明人通过直接重编程来集中尝试由人体细胞诱导OPC，从而通过将Oct4引入人体细胞并处理涉及形成少突胶质细胞的几种低分子量物质来确认诱导OPC的可能性，从而完成了本发明。

发明内容

技术问题

本发明涉及提供一种通过直接重编程由人体细胞诱导OPC的方法，其包括将其中引入有编码Oct4蛋白的核酸分子的人体细胞在含有特定低分子量物质的培养基中培养。