[发明专利]茉莉酸通路激活剂

说明书

发明领域

本发明涉及植物中蛋白的产生。本发明还涉及茉莉酸通路激活剂在增加植物或植物部分中异源蛋白的产生中的用途。

发明背景

植物逐渐被用作用于产生临床可用的重组蛋白的生物工厂。与植物产生的重组蛋白表达相关的优势包括，蛋白骨架的哺乳动物样翻译后成熟、较低的基础设施成本(与基于工业规模发酵罐的经典系统相比)和降低的关于产品的微生物毒素或人病原体污染的生物安全问题。

在植物提取物中富集重组蛋白的方法通常依赖合适的提取缓冲液pH或离子强度的选择，以优先移出宿主蛋白并促进进一步纯化。低pH下的硫酸铵沉淀和提取可用于绿色组织提取物，以沉淀污染物，如细胞碎片和光合色素。这些程序还可用于沉淀非常丰富的酶核酮糖1，5-二磷酸羧化酶加氧酶(RuBisCO)(Peckham等人，2006)，其代表叶片中高至50％的总的可溶性蛋白(TSP)，并且通常使高度纯化的蛋白产物的制备复杂化(例如，Gaeda等人，2007)。

茉莉酸甲酯(MeJA)是应激激素茉莉酸的挥发性衍生物(Okada等人，2015)。报道了MeJA和茉莉酸诱导的信号如创伤、食草动物或昆虫口腔分泌物对光合作用相关基因的转录的下调作用(Hermsmeier等人，2001；Jung等人，2007；Bilgin等人，2010；Zubo等人，2011；Duceppe等人，2012)。MeJA还显示促进叶片中核糖体基因的升高的表达，推测可用于维持响应于茉莉酸类信号传导通路的细胞中蛋白生物合成机制的活跃(Noir等人，2013)。

发明概述

本发明涉及植物中蛋白的产生。本发明还涉及茉莉酸通路激活剂在增加植物或植物部分中蛋白的产生中的用途。

本发明的目标是提供在植物或植物部分中产生目标异源蛋白的改善的方法。

描述了增加植物或植物部分中目标异源蛋白的表达的方法(A)。所述方法包括：

i)用茉莉酸类通路激活剂处理所述植物或植物部分；

ii)将包含编码所述目标异源蛋白的核酸并可操作地连接至来源于DNA植物病毒的调控区的核苷酸序列引入所述植物或植物部分；以及

iii)在一定条件下培养所述植物或植物部分，以允许编码所述目标异源蛋白的核苷酸序列的表达，当将提取自所述植物或植物部分的所述目标异源蛋白的量与包含相同的核苷酸序列并且未用所述茉莉酸类通路激活剂处理的第二植物或第二植物部分中产生的所述目标异源蛋白进行比较时，观察到表达增加。

以上概述的方法(A)中所述的DNA植物病毒可以是虫媒DNA植物病毒。此外，以上方法(A)中所述的茉莉酸类通路激活剂可以是茉莉酸甲酯，茉莉酸，冠菌素或者茉莉酸甲酯、茉莉酸或冠菌素的任何生物活性衍生物。

本文还描述了以上限定的方法(A)，其中在处理步骤(步骤i)中，将所述茉莉酸类通路激活剂作为气体应用于植物或植物部分，或者作为液体应用并喷涂到植物或植物部分上，或者添加至维持植物或植物部分的生长培养基中。可选地，可将处理步骤(步骤i)和引入步骤(步骤ii)组合，以将茉莉酸类通路激活剂以及核苷酸序列引入植物或植物部分。

以上所述的方法(A)中使用的茉莉酸类通路激活剂可以是气体或液体。

此外，提供如以上所限定的方法(A)，其中利用植物或植物部分所浸入的液体培养基，以瞬时方式将核苷酸序列引入植物或植物部分，并将茉莉酸类通路激活剂引入处理步骤(步骤i)中的液体培养基中。可选地，可将处理步骤(步骤i)和引入步骤(步骤ii)组合，以将茉莉酸类通路激活剂以及核苷酸序列引入液体培养基中，并将茉莉酸类通路激活剂和核苷酸序列共同引入植物或植物部分。

还提供降低植物或植物部分中总的宿主可溶性蛋白的方法(B)，其包括：

i)用茉莉酸类通路激活剂处理所述植物或植物部分；

ii)将包含编码目标异源蛋白的核酸并可操作地连接至来源于DNA植物病毒的调控区的核苷酸序列引入所述植物或植物部分；以及

iii)在一定条件下培养所述植物或植物部分，以允许编码所述目标异源蛋白的核苷酸序列的表达，当将提取自所述植物或植物部分的总的宿主蛋白的量与包含相同的核苷酸序列但是未用所述茉莉酸类通路激活剂处理的第二植物或第二植物部分中产生的总的宿主蛋白进行比较时，观察到总的宿主蛋白降低。