[发明专利]针对RSV的疫苗

说明书

本发明涉及组合物，这些组合物包含稳定化在该融合前构象的重组呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)多肽，其中如与野生型RSV F多肽相比，所述RSV F多肽包含至少一个突变，其中该至少一个突变选自下组，该组由以下各项组成：a)在位置486上的氨基酸天冬氨酸(D)的突变，b)在位置489上的氨基酸天冬氨酸(D)的突变，以及c)在位置398上的氨基酸丝氨酸(S)的突变和/或在位置394上的氨基酸赖氨酸(K)的突变。本发明还涉及包含编码所述稳定的RSV F多肽的分离的核酸分子的组合物。

技术领域

本发明涉及医学领域。更具体地，本发明涉及针对RSV的疫苗。

背景技术

在20世纪50年代发现呼吸道合胞病毒(RSV)后，该病毒很快成为人类中与下呼吸道感染和上呼吸道感染相关的公认的病原体。据估计，全世界每年有6400万RSV感染，导致16万人死亡(世卫组织急性呼吸道感染更新2009年9月)。最严重的疾病尤其发生在早产儿，老年人和免疫受损的个体中。在2岁以下的儿童中，RSV是最常见的呼吸道病原体，占因呼吸道感染而住院的约50％，并且住院高峰发生在2-4月龄。据报道，几乎所有儿童到2岁时都被RSV感染过。终身重复感染归因于无效的自然免疫力。在老年人中，RSV疾病负担与由非大流行性A型流感感染引起的那些相似。

RSV是一种属于肺病毒亚科的副粘病毒。它的基因组编码各种蛋白质，包括称为RSV糖蛋白(G)和RSV融合蛋白(F)的膜蛋白，它们是用于中和抗体的主要抗原靶标。针对F1蛋白质的融合介导部分的抗体可以防止细胞中的病毒吸收，并且因此具有中和作用。

当前不存在针对RSV感染的疫苗，但是由于疾病负担高其是被希望的。RSV融合糖蛋白(RSV F)是一种有吸引力的疫苗抗原，因为如上所述，它是人类血清中中和抗体的主要靶标。因此，针对RSV F(帕利珠单抗)的中和单克隆抗体可以防止严重的疾病并且已经被批准用于在婴儿中的预防。

RSV F通过从不稳定的融合前构象融合到稳定的融合后构象的不可逆的蛋白质重折叠，将病毒和宿主细胞膜融合。已经确定了RSV F(McLellan JS等人，Science[科学]342,592-598(2013)；McLellan JS等人，Nat Struct Mol Biol[自然结构与分子生物学]17,248-250(2010)；McLellan JS等人，Science[科学]340,1113-1117(2013)；Swanson KA等人，Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States ofAmerica[美国国家科学院院刊]108,9619-9624(2011))和来自相关的副粘病毒的融合蛋白的两种构象的结构，提供了对这种复杂的融合机器的机制的深刻理解。与其他I类型融合蛋白一蛋白质一样，无活性前体(RSV F₀)需要在细胞内成熟过程中通过弗林蛋白酶样蛋白酶进行切割。RSV F含有两个弗林蛋白酶位点，这导致三个多肽：F2、p27和F1，其中后者在其N-末端含有疏水性融合肽(FP)。为了从融合前构象重折叠成融合后构象，在残基137和216之间的包括FP和七肽重复区A(HRA)的重折叠区域1(RR1)必须从螺旋、环和链的组合转化成长的连续螺旋。然后，位于RR1的N-末端片段的FP能够远离病毒膜延伸并插入到靶细胞的近侧膜中。接下来，在融合前F刺突中形成C-末端茎并包括七肽重复区B(HRB)的重叠区域2(RR2)重新定位到RSV F的头部的另一侧并且将HRA卷曲螺旋三聚体与HRB结构域结合以形成六螺旋束。RR1卷曲螺旋的形成和RR2的重新定位以完成六螺旋束是在重折叠过程中发生的最显著的结构变化。

人类血清中的大多数中和抗体是针对融合前构象，但是由于它的不稳定性，融合前构象具有在溶液中和病毒体表面上过早重折叠成融合后构象的倾向。具有高表达水平并保持稳定的融合前构象的RSV F蛋白质将成为用于针对RSV的基于亚基或载体的疫苗的有希望的候选者。

发明内容