[发明专利]采用时间分辨发光确定核酸序列的方法

权利要求书

1.一种鉴别试样中的单个分子的方法，所述方法包括测定所述单个分子的发光寿命及任选的发光强度。

2.如权利要求1的方法，其进一步包括测定所述单个分子的发光寿命和发光强度二者。

3.如前述权利要求中任一项的方法，其进一步包括将一种或多种激发能的一系列脉冲递送至所述试样。

4.如前述权利要求中任一项的方法，其进一步包括检测来自所述试样的多个发射光子。

5.如前述权利要求中任一项的方法，其进一步包括针对多个来自所述试样的发射光子中的每一者，记录所述发射光子的检测与先前所递送激发能之间的持续时间。

6.如前述权利要求中任一项的方法，其中鉴别包括将所述单个分子鉴别为来自多个可能分子类型中的一种类型。

7.如权利要求6的方法，其中所述多个可能分子类型包括4种分子类型。

8.如权利要求7的方法，其中所述4个分子类型包括4种类型的经发光标记的核苷酸。

9.如权利要求8的方法，其中所述4种类型的经发光标记的核苷酸包括含有腺嘌呤的第一核苷酸、含有鸟嘌呤的第二核苷酸、含有胞嘧啶的第三核苷酸以及含有胸腺嘧啶或尿嘧啶的第四核苷酸。

10.如权利要求8或9的方法，其中所述单个分子是被纳入核酸中的经发光标记的核苷酸。

11.如前述权利要求中任一项的方法，其中重复所述方法以鉴别系列单个分子。

12.如权利要求11的方法，其中所述系列单个分子是系列被依序纳入包括引物的核酸中的经发光标记的核苷酸。

13.如权利要求12的方法，其进一步包括通过分析依序纳入包括引物的核酸中的经发光标记的核苷酸的序列，来测定模板核酸的序列。

14.如前述权利要求中任一项的方法，其中所述多个脉冲中的每一者均包括单个激发能。

15.如前述权利要求中任一项的方法，其中所述多个脉冲的第一部分包括第一激发能且所述多个脉冲的第二部分包括第二激发能。

16.如前述权利要求中任一项的方法，其中以介于约10MHz与约100MHz之间或介于约100MHz与约1GHz之间的平均频率递送所述系列脉冲。

17.如权利要求16的方法，其中所述频率介于约50MHz与约200MHz之间。

18.如前述权利要求中任一项的方法，其中对于所鉴别的每一单个分子，所检测发射光子数介于约10与约100之间或介于约100与约1,000之间。

19.如前述权利要求中任一项的方法，其中将所鉴别每一单个分子固定于固体支持物上。

20.如权利要求19的方法，其中所述固体支持物包括试样孔的底部表面。