[发明专利]单次注射竞争分析

说明书

这里公开了用于形成分散梯度的方法和在竞争分子存在下确定完全动力学和亲和性分析的SPR注射方法。所述SPR注射提供两个或更多个样品至SPR流槽和检测器的分散梯度。

相关申请的交叉引用

本申请要求美国临时申请No.62/191151(2015年7月10日提交)的权益。

背景技术

生物传感器通常用于复杂分子相互作用如药物-靶标、激素-受体、酶-底物和抗源-抗体之间的那些相互作用的动力学研究。生物传感器通常为基于流动注射的流动系统，其中一个或多个感应区容纳在所述流动系统的流槽管道内。所述流动系统还定义了一个或多个引导流体流入流槽管道内的感应区的流路管道。所述感应区提供支撑通常称为“配体”的固定分子的表面。所述配体为称作“分析物”的分子的可能的结合配体，它们存在于经流路管道引入流槽管道的感应区内的流体中。通常，作为亲和对一方的配体被固定到感应区内的表面上，而作为另一方的分析物则暴露于该覆有配体的表面足够时间以在感应区内形成分析物-配体复合物。

竞争分析能够直接通过竞争片段击中对照分子而发现活性位点连接剂。这类分析通常应用表面等离子共鸣(SPR)来进行。但竞争分析通常需要多个步骤以确定竞争分子的完全动力学和亲和性数据。因此，分析是耗时和昂贵的。

发明内容

这里公开了用于在竞争分子存在下确定完全动力学和亲和性分析的单次SPR注射方法。所述单次SPR注射提供两个或更多个样品至SPR流槽和检测器的分散梯度。

部分地，本公开内容提供一种用于进行分散梯度注射以通过传感器进行分析的方法。所述方法提供将含一种或多种分析物的第一样品抽入样品保持管线、接着将含一种或多种分析物的第二样品抽入样品保持管线，从而形成所述第一样品和第二样品的分散梯度。随后，所述方法推动所述分散梯度通过流动管线至传感器。

另外，本公开内容提供一种用于进行两种分析物竞争结合分析的方法。所述方法通过将第一体积的第一分析物抽入样品保持管线和将第二体积的第一分析物也抽入所述样品保持管线来准备第一分析物的对照样品。所述对照样品通过内部有结合的配体的SPR传感器注射。在对照样品通过SPR传感器时，应用SPR分析测量对照样品中第一分析物与所述配体的结合相互作用，以产生结合相互作用曲线。所述方法还通过将包含第一分析物和第二分析物的样品抽入样品保持管线和接着将第一分析物的样品也抽入所述样品保持管线从而形成结合竞争分析分散梯度而准备结合竞争分析分散梯度。在准备结合竞争分析分散梯度之后，所述方法推动所形成的竞争分析分散梯度通过所述SPR传感器和测量所述竞争分析分散梯度与所述配体的结合相互作用以产生结合相互作用曲线。从所述竞争分析分散梯度产生的结合相互作用曲线中减掉所述对照样品产生的结合相互作用曲线，以确定在第一分析物存在下第二分析物与配体的竞争结合。

附图说明

图1为SPR测试系统图，该SPR测试系统可应用一些实施方案的流体输送系统。

图2示意性描述了适用于实施本发明方法的系统的一种构造。

图3为图2中应用的十端口阀的第一位置的示意图。

图4为图2中应用的十端口阀的第二位置的示意图。

图5图2中应用的四端口阀的第一位置的示意图。

图6图2中应用的四端口阀的第二位置的示意图。

图7A-7E以简化方式描述了所述流动系统和两组分梯度的产生。

图8描述的图线代表了根据本发明方法通过按1:1比组合蔗糖和缓冲液形成的梯度，其中蔗糖首先被吸入样品保持管线。

图9描述的图线代表了根据现有技术方法通过按1:1比组合蔗糖和缓冲液形成的梯度。

图10描述的图线代表了根据本发明方法通过按1:1比组合蔗糖和缓冲液形成的梯度，其中蔗糖最后被吸入样品保持管线。