[发明专利]产生抗T细胞受体的抗体的方法

权利要求书

1.一种产生与感兴趣的细胞表面蛋白结合的抗体的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)提供非人类细胞，其不表达内源性的所述感兴趣的细胞表面蛋白但表达包含至少一段人类片段的外源性的所述感兴趣的细胞表面蛋白；

(b)用步骤(a)所提供的所述细胞系免疫非人类动物；

(c)由步骤(b)的经过免疫的所述非人类动物产生杂交瘤；

(d)通过使步骤(c)的所述杂交瘤分泌的抗体与不表达内源性的所述感兴趣的细胞表面蛋白但表达包含至少一段人类片段的外源性的所述感兴趣的细胞表面蛋白的人类细胞接触来筛选与所述感兴趣的细胞表面蛋白结合的抗体。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(d)中，使步骤(c)的所述杂交瘤分泌的所述抗体与不表达内源性的所述感兴趣的细胞表面蛋白的人类细胞混合物接触，所述人类细胞混合物包含：

(i)第一比例的所述人类细胞混合物，其表达感兴趣的功能性细胞表面分子；和

(ii)第二比例的所述人类细胞混合物，其不表达感兴趣的功能性细胞表面分子并且包含选择标记物，其中所述选择标记物优选为荧光标记物；

其中与(i)结合而不与(ii)结合表明所述抗体与所述感兴趣的细胞表面蛋白特异性结合。

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(b)中经过免疫的所述非人类动物是除了步骤(a)所提供的所述非人类细胞系以外的其它物种。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(b)中经过免疫的所述非人类动物是大鼠并且步骤(a)所提供的所述非人类细胞系是小鼠细胞系。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述感兴趣的细胞表面蛋白是至少一种感兴趣的TCR受体。

6.根据权利要求5所述的方法，其中步骤(a)所提供的所述细胞既不表达内源性TCR α链也不表达内源性TCR β链。

7.根据权利要求6所述的方法，其中步骤(a)所提供的所述细胞是既不表达所述内源性TCR α链也不表达所述内源性TCR β链但稳定表达荧光标记的人类CD3、优选CD3-GFP的细胞系。

8.根据权利要求7所述的方法，其中步骤(d)的人类细胞系是缺乏功能性TCR的Jurkat细胞系。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述外源性TCR包含可变人类TCR α链和可变人类TCR β链。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述外源性TCR包含恒定小鼠TCR α链和恒定小鼠TCR β链。

11.根据权利要求6至10所述的方法，其中所述抗体与至少一种T细胞受体可变α链(TCRVα)结合或与至少一种T细胞受体可变β链(TCR Vβ)结合，所述方法包括以下步骤：

(a)提供非人类细胞，其既不表达所述内源性TCR α链也不表达所述内源性TCR β链但是表达包括可变人类TCR Vα链的外源性TCR α链和包括可变人类TCR β链的外源性TCR β链；

(b)用步骤(a)所提供的所述细胞系免疫非人类动物；

(c)由步骤(b)的经过免疫的所述非人类动物产生杂交瘤；

(d)通过使步骤(c)的所述杂交瘤分泌的抗体与既不表达所述内源性TCR α链也不表达所述内源性TCR β链的人类细胞混合物接触来筛选与感兴趣的TCR结合的抗体，所述人类细胞混合物包括：

(i)第一比例的所述人类细胞混合物，其包含具有由步骤(a)所提供的所述非人类细胞表达的所述TCR链的TCR，

(ii)第二比例的所述人类细胞混合物，其不包含功能性TCR但包含选择标记物；

其中与(i)结合而不与(ii)结合表明所述抗体与至少一种TCR Vα链结合或者与至少一种TCR Vβ链结合。