[发明专利]革兰氏阴性菌外膜囊泡抗原表面展示

权利要求书

1.融合脂蛋白，其包含N-末端和C-末端融合配偶体，其中：

a)所述N-末端融合配偶体从N至C-末端顺序包含：

i)脂化的N-末端半胱氨酸；

ii)革兰氏阴性细菌的暴露于表面的脂蛋白的系链，其中优选所述系链位于所述脂化的N-末端半胱氨酸邻近处；并且，优选地，

iii)至少5、10或17个连续氨基酸的区段，其位于所述革兰氏阴性细菌的暴露于表面的脂蛋白的氨基酸序列中的系链的C-末端；

并且其中所述N-末端融合配偶体在革兰氏阴性细菌中表达时，导致所述融合脂蛋白表达于所述革兰氏阴性细菌细胞外外膜表面上；以及，

b)所述C-末端融合配偶体包含与感染性疾病和/或肿瘤相关的抗原的至少一个表位，

并且其中所述融合脂蛋白的氨基酸序列在自然界中不存在。

2.权利要求1的融合脂蛋白，其中所述N-末端融合配偶体包含来自革兰氏阴性细菌的暴露于表面的脂蛋白的N-末端片段，并且其中所述片段在所述革兰氏阴性细菌中表达时导致所述融合脂蛋白的表面表达。

3.权利要求1或2的融合脂蛋白，其中所述革兰氏阴性细菌是奈瑟氏菌属的细菌，优选是脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌或乳屑奈瑟氏菌，并且其中所述暴露于表面的脂蛋白优选选自由以下组成的组：fHbp、LpbB、TbpB、NHBA和Ag473。

4.权利要求1-3任一项的融合脂蛋白，其中所述N-末端融合配偶体至少包含：

a)与SEQ ID NO：1的第20-38位的氨基酸序列具有至少60％序列相同性的氨基酸序列，优选与SEQ ID NO：1的第20-50位的氨基酸序列具有至少60％序列相同性的氨基酸序列；

b)与SEQ ID NO：2的第21-61位或第21-63位的氨基酸序列具有至少60％序列相同性的氨基酸序列，优选与SEQ ID NO：2的第21-73位或第21-75位的氨基酸序列具有至少60％序列相同性的氨基酸序列；或者，

c)与SEQ ID NO：3的第23-51位的氨基酸序列具有至少60％序列相同性的氨基酸序列，优选与SEQ ID NO：3的第23-63位的氨基酸序列具有至少60％序列相同性的氨基酸序列。

5.前述权利要求任一项的融合脂蛋白，其中配偶体所述N-末端融合配偶体的序列来源于所述暴露于表面的脂蛋白的氨基酸序列，而所述C-末端融合配偶体缺少来自所述暴露于表面的脂蛋白的所述氨基酸序列，其中优选地，所述C-末端融合配偶体包含来自感染原或肿瘤的蛋白性抗原的暴露于表面的表位或由感染原或肿瘤的蛋白性抗原的暴露于表面的表位组成。

6.权利要求5的融合脂蛋白，其中所述C-末端融合配偶体包含暴露于表面的细菌蛋白质或脂蛋白的暴露于表面的结构域或由暴露于表面的细菌蛋白质或脂蛋白的暴露于表面的结构域组成，所述脂蛋白优选为选自由以下组成的组的疏螺旋体表面脂蛋白：OspA、OspB、OspC、OspF、VlsE、BbCRASP1、Vsp1、P35(BBK32)、P37(BBK50)、P39、P66、DpbA和BB017，更优选为包含以下的疏螺旋体表面脂蛋白：SEQ ID NO：4的第29-273位氨基酸、SEQ ID NO：58的第29-273位氨基酸或者SEQ ID NO：59的第136-210位的氨基酸。

7.OMV，其包含权利要求1-6任一项所定义的融合脂蛋白，其中所述OMV优选地不是以去污剂提取的OMV，其中优选地，所述OMV是上清液OMV或原生OMV，其中原生OMV是最优选的。

8.权利要求7的OMV，其中所述OMV可从革兰氏阴性细菌中获得，所述革兰氏阴性细菌具有选自由以下组成的组中的一种或多种遗传修饰：

a)导致细菌产生具有降低的毒性的LPS的遗传修饰，其中优选地，所述遗传修饰减少或消除lpxL1、lpxL2和lpxK中至少一个基因或其同系物的表达，和/或增加lpxE、lpxF和pagL中至少一个基因的表达；

b)增加囊泡形成的遗传修饰，其中优选地所述遗传修饰减少或消除ompA基因或其同系物的表达，更优选地减少或消除rmpM基因或其同系物的表达；和，

c)防止暴露于细胞表面的脂蛋白的蛋白水解释放的遗传修饰，其中优选地所述遗传修饰减少或消除nalP基因或其同系物的表达。