[发明专利]人工非核糖体肽合成酶

权利要求书

1.产生包含两个或更多个交换单元(EU)的装配的NRPS的方法，所述装配包含编码包含A结构域接着T和C结构域的多肽的EU。

2.权利要求1的方法，其中所述装配的第一个EU在第一个A结构域之前具有额外的C结构域。

3.权利要求1的方法，其中所述装配的最后的EU由A、T和TE结构域中的任一构成。

4.权利要求1的方法，其中所述装配的最后的EU为TE结构域。

5.权利要求4的方法，其中装配的最后的EU前面的EU由A和T结构域构成。

6.权利要求1-5的方法，其中Cy或C_term结构域可代替C结构域。

7.权利要求1-6的方法，其中修饰结构域例如E、MT或Ox可加至EU。

8.权利要求1-7的方法，其中EU的装配由衍生自物种例如但不限于细菌、真菌或植物的EU结构域构成。

9.权利要求8的方法，其中来自特定物种的C结构域和随后的来自另一个物种的EU的A结构域的底物特异性必须相同或相关。

10.权利要求1-9的方法，其中EU的装配可通过分子生物学的方法实现，例如但不限于Gibson克隆或基于酵母的TAR-克隆。

11.权利要求1-10的方法，其中EU结构域之间的边界由C-A接头内的共有序列Trp-Asn-Ala-Thr-Glu定义。

12. 权利要求1-11的方法，其中所述NRPS包括PKS或NRPS-PKS EU。

13.权利要求1-12的方法，其中所述NRPS包含2-10个EU。

14.权利要求1-12的方法，其中所述NRPS包含11-100个EU。

15. 权利要求8的方法，其中所述细菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)、链霉菌属(Streptomyces)物种或大肠杆菌(Escherichia coli)，并且其中所述真菌为酵母细胞。

16. 权利要求1-14的方法，用于鉴定和产生具有例如抗菌、抗真菌、抗肿瘤剂或免疫抑制剂活性的肽。

17. 包含编码含有EU的装配的NRPS的基因的试剂盒，包括

a) 下列EU结构域A、T、C或

b) 包含修饰结构域例如E、MT或Ox或其它NRPS结构域的EU的装配或

c) 包含C作为第一个EU的EU的装配或

d) 包含A、T或TE作为最后的EU的EU的装配或

e) 包含Cy或C_term代替C的EU的装配或

d) 包含来自不同物种的EU结构域的EU结构域的装配，其中来自不同物种的相邻的C和A结构域必须具有相同或相似的底物特异性和

e) EU结构域之间的边界由C-A接头内的序列Trp-Asn-Ala-Thr-Glu定义。

18.由权利要求17的试剂盒产生的NRPS基因文库，所述文库在文库中的每一NRPS基因中包含至少15个EU编码基因变体。

19.由权利要求17的试剂盒产生的NRPS基因文库，所述文库在文库中的每一NRPS基因中包含至少25个EU编码基因变体。

20.由权利要求17的试剂盒产生的NRPS基因文库，所述文库在文库中的每一NRPS基因中包含至少50个EU编码基因变体。

21.由权利要求17的试剂盒产生的NRPS基因文库，所述文库在文库中的每一NRPS基因中包含至少100个EU编码基因变体。

22.权利要求18-21的NRPS基因文库，其中文库多样性已经通过随机诱变增加。