[发明专利]用于测序的底物和方法

权利要求书

1.一种形成核酸底物的方法，所述方法包括：

活化底物的偶联位点；

对经修饰的寡核苷酸进行离子交换，所述经修饰的寡核苷酸包括偶联到寡核苷酸的5’末端的连接基部分，其中官能部分偶联于所述寡核苷酸的5’末端和所述连接基部分之间，其中所述官能部分为染料部分或缓冲部分，其中染料部分为罗丹明部分或荧光素部分，和其中缓冲部分为吗啉基烷基、三乙醇胺、N-[三(羟甲基)甲基]-2-氨基乙磺酸、3-(N-三[羟甲基]甲氨基)-2-羟基丙磺酸、N-(2-羟乙基)哌嗪-N-(2-乙磺酸)、N-(2-乙酰胺基)-2-氨基乙磺酸、咪唑、乙酸盐或它们的任何组合；和

使所述经修饰的寡核苷酸的连接基部分键合到活化的偶联位点。

2.一种对核酸靶标进行测序的非诊断目的的方法，所述方法包括：

将离散的底物施加于测序装置，所述离散的底物在所述离散的底物的偶联位点处缀合到所述核酸靶标的末端，官能部分偶联于所述核酸的所述末端和所述底物之间，其中所述官能部分为染料部分或缓冲部分，其中染料部分为罗丹明部分或荧光素部分，和其中缓冲部分为吗啉基烷基、三乙醇胺、N-[三(羟甲基)甲基]-2-氨基乙磺酸、3-(N-三[羟甲基]甲氨基)-2-羟基丙磺酸、N-(2-羟乙基)哌嗪-N-(2-乙磺酸)、N-(2-乙酰胺基)-2-氨基乙磺酸、咪唑、乙酸盐或它们的任何组合；

施加与所述靶核酸的一部分互补的引物；

使核苷酸流入所述测序装置中；以及

检测与所述核苷酸相关联的掺入事件。

3.一种形成核酸底物的方法，所述方法包括：

在一定条件下使缀合至寡核苷酸偶联位点的底物暴露于酶、核苷酸以及与所述寡核苷酸的至少一部分互补的靶多核苷酸以促进寡核苷酸的延伸，官能部分键合于所述寡核苷酸的5’末端和所述偶联位点之间，其中所述官能部分为染料部分或缓冲部分，其中染料部分为罗丹明部分或荧光素部分，和其中缓冲部分为吗啉基烷基、三乙醇胺、N-[三(羟甲基)甲基]-2-氨基乙磺酸、3-(N-三[羟甲基]甲氨基)-2-羟基丙磺酸、N-(2-羟乙基)哌嗪-N-(2-乙磺酸)、N-(2-乙酰胺基)-2-氨基乙磺酸、咪唑、乙酸盐或它们的任何组合；以及

在所述寡核苷酸的延伸之后洗涤所述底物。

4.根据权利要求3所述的方法，其中暴露所述底物在乳液中执行。

5.根据权利要求4所述的方法，还包括在洗涤之前破乳以回收所述底物。

6.根据权利要求5所述的方法，还包括富集所述底物以使所述底物与未扩增的底物分离。

7.根据权利要求6所述的方法，还包括使所述底物沉积到测序装置上。

8.根据权利要求7所述的方法，还包括对所述延伸的寡核苷酸进行测序，所述方法为非诊断目的方法。

9.根据权利要求3所述的方法，其中所述末端为所述寡核苷酸的所述5'端。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述末端为所述寡核苷酸的所述5'端。

11.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，还包括对所述寡核苷酸进行离子交换。

12.根据权利要求 1-9 中任一项所述的方法，其中所述官能部分附接至经修饰的核苷酸。

13.根据权利要求 12 所述的方法，其中所述经修饰的核苷酸包括嘧啶碱基，所述官能部分偶联到所述嘧啶碱基。

14.根据权利要求 13 所述的方法，其中所述官能部分附接至所述嘧啶碱基的所述 5位。

15.根据权利要求 13 所述的方法，其中所述嘧啶碱基包括胸苷或胞苷。