[发明专利]口服肿瘤疫苗

说明书

本发明提供一种能够通过可表达或呈递WT1蛋白质的转化双歧杆菌口服给药的肿瘤疫苗；不同于被限制为某一特定HLA的WT1肽疫苗，被表达或呈递于转化双歧杆菌上的WT1蛋白质是将WT1蛋白质的大部分覆盖的蛋白质；将该转化双歧杆菌作为有效成分的肿瘤疫苗能够适用于各种HLA类型的患者。

技术领域

本法明涉及能够表达或呈递作为抗原的WT1蛋白质的转化双歧杆菌，进一步涉及将该转化双歧杆菌作为有效成分的肿瘤疫苗。

本申请请求通过参考援引于此的日本申请特愿2015-128034号作为优先权。

背景技术

WT1(Wilms tumor 1)基因是作为儿童肾肿瘤、即肾母细胞肿瘤的致病基因之一而分离出的基因。在肾母细胞肿瘤中，存在该基因的缺失或突变，在源自肾母细胞肿瘤的细胞株中导入正常的WT1基因时，细胞增殖被抑制，因而认为WT1基因是抑癌基因。但是，通过之后的研究，发现WT1蛋白质在白血病或各种固体癌中的表达量很高，与其说WT1基因是抑癌基因，不如说其发挥了致癌基因的功能(非专利文献1：Jpn J Clin Oncol 2010；40：377-387)。

癌的免疫疗法始于1980年代通过自然免疫进行的LAK疗法，目前进行NK细胞疗法等的自然免疫疗法和利用获得性免疫的治疗，其中，利用获得性免疫的治疗有：将构成癌抗原的蛋白质的片段的肽作为靶的肽疗法、使树状细胞识别癌肽并导回体内的树状细胞疫苗疗法等。

发现在利用WT1肽对小鼠进行免疫、或者利用WT1肽对于从人的外周血单核细胞分化出的树状细胞进行刺激时，WT1肽可以作为能够诱导WT1特异性细胞毒性T细胞的树状细胞疫苗进行使用。另外，也使用WT1肽进行了临床试验。由于现有的WT1肽以适于某一特定的人白细胞抗原(HLA)的方式进行制备，因而需要通过DNA分型来确认患者的HLA等位基因(专利文献1：日本专利特许第5714619号公报)。通过之后的研究，尝试使用将WT1蛋白质的全部序列覆盖的全序列型疫苗治疗癌症。该疫苗也能够适用于各种HLA类型的患者。该疫苗也将癌抗原特异性的杀伤性T细胞和促进免疫反应的辅助性T细胞激活。

作为WT1疫苗的给药途径，最常见的有皮下或皮内注射，除此之外，还尝试通过各种给药途径，例如经皮给药、颊给药、经鼻给药、舌下给药等的黏膜给药进行免疫诱导。但是，目前尚未有关于口服给药的报告。

细胞的细胞膜是将细胞内外分离的生物膜，细胞膜表面上存在大量具有提供细胞信息的功能和输送细胞内外物质的功能的膜蛋白质。提出了使特定的抗原与膜蛋白融合并呈递于微生物的细胞表层，作为人为诱导抗原抗体反应的口服疫苗进行使用这一概念。例如，存在使用具有对聚-γ-谷氨酸合成酶等酶蛋白的膜结合部进行编码的基因的载体，呈递于宿主微生物的细胞表层的例子(专利文献2：日本专利特表2005-50054号公报)。另外，关于将源自引起传染病的细菌的鞭毛蛋白质作为疫苗使用的技术，存在关于作为胶囊内容物而含有表达鞭毛蛋白的转化微生物的口服疫苗的报告(专利文献3：日本专利特许5187642号公报)。在此，有报告称作为生成鞭毛蛋白的细菌而使用属于双歧杆菌(Bifidobacterium)属的微生物(将其总称为“双歧杆菌”)、或者乳酸菌等所有被称为有益菌的肠内细菌来制备转化微生物。

双歧杆菌是在人或其他动物的小肠下游或大肠中发现的正常细菌，且是专性厌氧性的革兰氏阳性菌，因而培养的选择性高。而且，由于其生物相容性也高，且不存在革兰氏阴性菌中存在的内毒素，因而安全性高。因此，双歧杆菌根据有关食品安全性的审查制度的基准得到了GRAS认证。另外，也有报告称双歧杆菌具有与由覆盖肠管的粘液素构成的黏液的结合性，因而认为其在肠内的肠壁上的附着性高于其他细菌。有报告称已开发出使蛋白质或肽表达、呈递至该双歧杆菌的表层上的技术、以及关于通过使用该技术的双歧杆菌制造新疫苗的技术(专利文献4：日本专利特许第5561681号公报)。

【现有技术文献】

【非专利文献】