[发明专利]麦芽糖依赖性降解决定子、麦芽糖响应型启动子、稳定化构建体及其在生成非分解代谢化合物中的用途

权利要求书

1.生成异源性非分解代谢化合物的方法，所述方法包括在培养基中培养遗传修饰的宿主细胞，所述遗传修饰的宿主细胞包含：

(a)异源性核酸，所述异源性核酸编码用于生成所述异源性非分解代谢化合物的生物合成途径的酶，其中所述异源性核酸可操作地连接至第一启动子；

(b)编码影响细胞生长的蛋白的核酸，其中所述核酸可操作地连接至第二启动子；和

(c)编码转录调控因子的核酸，

其中所述第一启动子和所述第二启动子均由所述转录调控因子进行调控，和

其中所述转录调控因子的功能性破坏负面影响编码所述生物合成途径的所述酶的所述异源性核酸和编码所述影响细胞生长的蛋白的所述异源性核酸两者的表达。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述遗传修饰的宿主细胞进一步包含编码所述生物合成途径的一种或多种另外的酶的一种或多种另外的异源性核酸，其中所述一种或多种另外的异源性核酸中的每一种可操作地连接至另外的启动子，所述另外的启动子是由与所述第一和第二启动子相同的转录调控因子进行调控。

3.生成异源性非分解代谢化合物的方法，所述方法包括在培养基中培养遗传修饰的宿主细胞，所述遗传修饰的宿主细胞包含：

(a)用于编码异源性非分解代谢化合物的异源性核酸，其中所述异源性核酸可操作地连接至第一启动子；

(b)编码影响细胞生长的蛋白的核酸，其中所述核酸可操作地连接至第二启动子；

(c)编码转录调控因子的核酸，

其中所述第一启动子和所述第二启动子均由所述转录调控因子进行调控，和

其中所述转录调控因子的功能性破坏负面影响编码所述异源性非分解代谢化合物的所述异源性核酸和编码所述影响细胞生长的蛋白的所述核酸两者的表达。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述异源性非分解代谢化合物是目的蛋白。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述第一启动子和所述第二启动子均选自pGAL启动子。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其中所述转录调控因子是转录激活因子Gal4p。

7.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其中所述转录调控因子是转录抑制因子Gal80p。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其中所述第一启动子和所述第二启动子均选自由pGAL1、pGAL2、pGAL3、pGAL7、pGAL10、pGCY1、pGAL80、和pGAL合成启动子组成的组。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述pGAL合成启动子选自由以下组成的组：pGAL2_v3(SEQ ID NO：84)，pGAL7_v1(SEQ ID NO：85)，pGAL2_v4(SEQ ID NO：86)，pGAL1_v3(SEQID NO：87)，pGAL10_v3(SEQ ID NO：88)，pGAL2_v2(SEQ ID NO：89)，pGAL7_v2(SEQ ID NO：90)，其保留启动子功能的部分，或与其具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。

10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其中编码所述影响细胞生长的蛋白的所述异源性核酸是必需基因。

11.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其中编码所述影响细胞生长的蛋白的所述异源性核酸是条件性必需基因。

12.根据权利要求10或11所述的方法，其中所述影响细胞生长的蛋白是生物合成途径的酶，所述生物合成途径生成所述遗传修饰的宿主细胞在所述培养基中生长所必需的必需化合物。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述必需化合物是氨基酸、核苷酸、脂肪酸、或其组合。