[发明专利]麦芽糖依赖性降解决定子、麦芽糖响应型启动子、稳定化构建体及其在生成非分解代谢化合物中的用途

权利要求书

1.控制遗传修饰的酵母宿主细胞中目的蛋白的表达和稳定性的方法，所述方法包括：

(a)在包含碳源的培养基中培养遗传修饰的酵母宿主细胞群，所述碳源包含麦芽糖基诱导物，其中所述遗传修饰的酵母宿主细胞包含与编码融合蛋白的异源性核酸可操作地连接的麦芽糖响应型启动子，所述融合蛋白包含与麦芽糖依赖性降解决定子框内融合的目的蛋白；和

(b)在包含碳源的培养基中培养所述宿主细胞群或其亚群，其中与步骤(a)中的所述培养基相比，所述麦芽糖基诱导物不存在或以小于0.25％w/v的量存在，

其中融合蛋白中的麦芽糖依赖性降解决定子的氨基酸序列如以下所示：(1)SEQ IDNO：4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26；(2)SEQ ID NO：16、18、20、22、24或26的位置1至位置365；或(3)SEQ ID NO：16、18、20、22、24或26的位置1至位置370，并且

其中所述麦芽糖响应型启动子的序列选自由以下组成的组：SEQ ID NO：29的pMAL1，SEQ ID NO：30的pMAL2，SEQ ID NO：31的pMAL11，SEQ ID NO：32的pMAL12，SEQ ID NO：33的pMAL31，SEQ ID NO：34的pMAL32，SEQ ID NO：78的pMAL32_v1，SEQ ID NO：35的pGMAL_v5，SEQ ID NO：36的pGMAL_v6，SEQ ID NO：37的pGMAL_v7，SEQ ID NO：38的pGMAL_v9，SEQ IDNO：39的pGMAL_v10，SEQ ID NO：40的pGMAL_v11，SEQ ID NO：41的pGMAL_v12，SEQ ID NO：42的pGMAL_v13，SEQ ID NO：43的pGMAL_v14，SEQ ID NO：44的pGMAL_v15，SEQ ID NO：45的pGMAL_v16，SEQ ID NO：46的pGMAL_v17，SEQ ID NO：47的pGMAL_v18，SEQ ID NO：48的pG2MAL_v1，SEQ ID NO：49的pG2MAL_v2，SEQ ID NO：50的pG2MAL_v3，SEQ ID NO：51的pG2MAL_v5，SEQ ID NO：52的pG2MAL_v6，SEQ ID NO：53的pG2MAL_v7，SEQ ID NO：54的pG2MAL_v8，SEQ ID NO：55的pG2MAL_v9，SEQ ID NO：56的pG2MAL_v10，SEQ ID NO：57的pG7MAL_v2，SEQ ID NO：58的pG7MAL_v4，SEQ ID NO：59的pG7MAL_v6，SEQ ID NO：60的pG7MAL_v8，SEQ ID NO：61的pG7MAL_v9，SEQ ID NO：62的pG172_MAL_v13，SEQ ID NO：63的pG271_MAL_v12，SEQ ID NO：64的pG721_MAL_v11和SEQ ID NO：65的pG712_MAL_v14。

2.根据权利要求1所述的方法，其中与步骤(b)相比，在步骤(a)中在所述麦芽糖基诱导物存在下，所述异源性核酸的转录被激活，和由其编码的所述融合蛋白被稳定。

3.根据权利要求1所述的方法，其中编码所述融合蛋白的所述异源性核酸被整合到所述遗传修饰的酵母宿主细胞的基因组中。

4.根据权利要求3所述的方法，其中整合到所述遗传修饰的酵母宿主细胞的所述基因组中的所述异源性核酸功能性破坏编码所述目的蛋白的内源性核酸。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述融合蛋白直接或间接调节一种或多种靶分子的水平，其中所述靶分子是其量或表达水平直接或间接受融合蛋白活性的影响的目的分子。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述遗传修饰的酵母宿主细胞进一步包含生物分子，所述生物分子在所述宿主细胞中与所述融合蛋白相互作用以调节所述一种或多种靶分子的水平。

7.根据权利要求5所述的方法，其中所述遗传修饰的酵母宿主细胞进一步包含编码所述一种或多种靶分子的一种或多种异源性核酸。