[发明专利]分离抗体的分离基质和方法

说明书

本发明公开一种包含抗体‑结合蛋白配体已被共价固定于其上的多孔球形粒子的分离基质，其中所述配体的密度在10.5‑15 mg/ml的范围内和所述粒子的体积‑加权中位直径在30‑55μm的范围内。本发明还公开一种通过在色谱柱中使用所述分离基质的亲和色谱分离抗体的方法。

本发明的技术领域

本发明涉及分离基质，且更特别地涉及可用于抗体分离的分离基质。本发明还涉及在基质上分离抗体的方法。

发明背景

在治疗性单克隆抗体(mAb)的制备中，在包含偶联的葡萄球菌(Staphylococcus)蛋白A(SpA)或SpA的变体的基质上的亲和色谱通常用作第一分离步骤，以除去大多数污染物。由于治疗性mAb的需求不断增加，对于提高分离过程的效率存在强大的驱动力，且几种方法正在评估中。

多柱连续色谱过程是可利用的，其中所述进料被施加于第一个柱，并且当第一个柱趋于饱和时则转移到一个或多个随后的柱中，在洗脱和再生随后的柱期间洗脱第一个柱并再生以再次加载。这样的过程可代表周期性反流色谱(PCC)或模拟移动床(SMB)并对分离治疗性mAb具有相当大的意义，见例如US7901581、US20130248451、US20130280788和US7220356，其通过引用以其整体结合到本文中。PCC/SMB过程可显著增加生产率，但似乎用目前可获得的分离基质(其被设计用于传统批量色谱)不能达到全部潜力。

因此，对专门设计用于连续色谱过程的新的分离基质和对使用这样的基质的方法存在着需求。

发明概述

本发明的一个方面是提供一种允许以高生产率连续分离mAb的分离基质。这用如在权利要求1中定义的基质实现。

一个优点是基质在非常短的停留时间内具有高结合能力。

本发明的第二方面是提供一种允许以高生产率连续分离mAb的色谱柱。这用如在权利要求书中定义的柱实现。

本发明的第三方面是提供一种允许以高生产率连续分离mAb的多柱色谱系统。这用如在权利要求书中定义的系统实现。

本发明的第四方面是提供一种分离抗体的有效方法。这用如在权利要求书中定义的方法实现。一个优点是该方法允许非常短的停留时间以及高结合能力。

本发明的其它合适的实施方案在所附权利要求书中描述。

附图

图1显示蛋白A Fc-结合结构域的比对。

图2显示来自实施例1的色谱图。UV样本前(UV Sample Pre) = 进料的UV吸光度，UV样本后(UV Sample Post) =柱流出物的UV吸光度。

图3显示与参考基质比较，本发明的基质的动态结合能力。

图4显示依据本发明的柱。

图5显示依据本发明的色谱系统。

实施方案的详细描述

在一个方面，由图1-3所说明的，本发明公开一种包含多孔的、适当球形的、抗体-结合蛋白配体已被共价固定于其上的粒子的分离基质。这些配体的密度大于10 mg/ml，例如在10.5-15 mg/ml，例如10.5-12 mg/ml的范围内，和粒子的体积-加权中位直径在30-55 μm，例如45-55 μm或50-55 μm的范围内。配体的密度表示每毫升基质沉积体积中偶联的配体的含量，且其可例如通过氨基酸分析测定。体积加权中位直径，也指d50,v，可通过电臭氧感应(Coulter Counter)、激光衍射或显微镜与图像分析来测定。一种优选的方法是使用电臭氧感应与用所提及基质的狭窄筛分数校准的设备，对于其的d50,v已用显微镜和图像分析测定。