[发明专利]包含脂肪酶和蛋白酶的液体洗涤组合物

说明书

背景技术

包含酶的液体洗涤组合物已经在过去几年中变得更普遍。特别是包含脂肪酶和蛋白酶的液体洗涤产品已经被发现用于更有效地去除基于脂肪和蛋白质的污渍。

然而，在液体洗涤组合物中使用这样的酶的主要问题是它们在液体洗涤组合物的使用寿命期间易于发生酶活性降低，导致去污效率降低。配制包含蛋白酶的多酶液体洗涤组合物的另一个问题是蛋白酶通过蛋白水解攻击使组合物中的其他酶失活的倾向。增加酶活性的一种方式是简单地将更多的酶添加到洗涤组合物中，但是这导致成本增加。事实上，洗涤组合物市场虽然是高容量市场，但由于原料成本往往具有低利润率。

在洗涤组合物的保质期内维持酶活性的另一种方式是通过使用结晶酶。这样的结晶酶描述于US2002/0137156，US2002/0082181和US2001/0046493中。然而，结晶酶比其非结晶对应物更昂贵，并且其制造本身也是耗时且费力的过程。因此，使用结晶酶维持液体洗涤组合物中酶的稳定性和活性并不是有用的技术。

或者，还已经描述了将酶与支架如活化聚合物(US6,030,933)或非材料表面(US2007/077565)或活化底物(US2004/0029242)结合。再次地，使用这样的支架和将酶与其结合的额外步骤增加了成本和酶制备复杂性。因此，这些也不被认为是制备包含酶的液体洗涤组合物的有用技术。

US2008/0296231公开了用于制备交联酶聚集体(CLEA)的方法，其允许使用更宽范围的试剂和获得具有改善的性质的酶聚集体的可能性(US2008/0296231)。含有脂肪酶的交联酶聚集体是可商购的(例如，来自Sigma Aldrich或Novozymes)。

本发明的目的是提供包含脂肪酶和蛋白酶的简单且有成本效益的液体洗涤组合物，优选液体洗衣组合物，其中所述脂肪酶在储存条件期间保持改善的稳定性和活性。

发明内容

上述目的中的一个或多个已经通过包含特定脂肪酶的液体洗涤组合物满足，所述特定脂肪酶被发现甚至在蛋白酶存在下在储存过程中更稳定。

因此，在第一方面，本发明涉及液体洗涤组合物，其包含：

●蛋白酶，和

●脂肪酶，其中所述脂肪酶包含具有与源自Humicola lanuginosa菌株DSM 4109的野生型脂肪酶具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的多肽，并且与所述野生型脂肪酶相比，包含在E1或Q249的15A内用带正电荷的氨基酸取代电中性或带负电荷的氨基酸的置换。

发现所述液体洗涤组合物在与其他可商购脂肪酶(例如Thermomyces lanuginose脂肪酶)的使用相比时，表现出更好的脂肪酶的酶稳定性和活性。即使当使用脂肪酶的交联聚集体与脂肪酶的可商购交联酶聚集体(Thermomyces lanuginose脂肪酶，Sigma cat#07676，供应商：Sigma Aldrich)比较时，也发现这种情况。

据信对蛋白水解攻击的改善的抗性通过制造脂肪酶的CLEA的特定方法进一步增强。事实上，酶具有复杂的三维结构和多个官能团，通过它们可以交联形成CLEA。例如，交联可以基于使用伯胺(-NH₂)、羧基(-COOH)、巯基(-SH)和/或羰基(-CHO)的交联。不同的交联剂可以具有不同的反应性和选择性，特别是交联三维结构内的氨基酸。发现在脂肪酶的情况下通过使用二醛的交联对于维持CLEA脂肪酶的稳定性和活性是特别有利的。

因此，在第二方面，本发明涉及用于制造脂肪酶的CLEA的方法，其包括以下步骤：

1)提供所述脂肪酶的水性悬浮液；

2)所述酶的沉淀；

3)通过加入二醛使所述酶交联。

具体实施方式

除非另有说明，否则本文提及的所有百分数均按总组合物重量计算。除非另有说明，否则缩写“重量％”应理解为总组合物的重量％。应理解，洗涤组合物中成分的总量将不超过100重量％。

脂肪酶

根据本发明的液体洗涤组合物包含脂肪酶，所述脂肪酶包含具有与源自Humicola lanuginosa菌株DSM 4109的野生型脂肪酶具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的多肽，并且与所述野生型脂肪酶相比，包含在E1或Q249的15A内用带正电荷的氨基酸取代电中性或带负电荷的氨基酸的置换。脂肪酶优选进一步包含以下中的一种或多种：

(I)在C端的肽的增加；

(II)在N端的肽的增加；