[发明专利]鸭肠炎病毒及其用途

说明书

本发明涉及DEV及其用途。本发明特别适合于针对禽病原体接种家禽。

发明领域

本发明涉及新病毒及其用途。更具体地，本发明涉及新的鸭肠炎病毒构建体及其表达或递送目的多肽至动物、特别是家禽的用途。本发明特别适合于接种家禽以对抗禽病原体。

发明背景

家禽肉和蛋是重要的食物来源，其消耗由于人群增长和它们极大的品质-价格比率而持续增加。最近的禽流感流行病将舆论聚焦于家禽健康以及食品安全和保障，并且家禽疫苗技术已成为全球性的关注。

表达病原体蛋白的重组病毒通常用作针对靶向的病原体的家禽疫苗。包括这样的病毒的疫苗在感染的细胞内诱导外源病原体蛋白或其片段的表达，其可随后诱导特异性和保护性体液免疫以及细胞介导的免疫。

在此方面，已开发其中已整合了源自病原体的外源基因的许多病毒，用作病毒载体的疫苗。这些病毒载体(或重组病毒)通常基于禽痘病毒例如禽痘(EP-A-0,517,292)、疱疹病毒，特别是HVT(例如，WO-A-87/04463、5,980,906、5,853,733)、新城疫病毒(NDV)或禽腺病毒。这些重组禽病毒显示可变水平的保护作用，取决于疾病和/或动物。

例如，因为痘病毒、NDV和腺病毒在鸡中不持续存在，它们不被视为在鸡中持续时间长的免疫的最佳候选物。重组HVT表达的抗原已显示益处，并且目前被商业化用于在鸡中接种(例如，IBD、ND或LT)。

然而，考虑到日益增加的病原体数量和多样性，和家禽消耗的持续增长，对可用于在家禽中引起有效的保护性免疫的备选接种策略和/或系统存在需要。特别地，对在非常幼小的动物(3天或更小)或在胚蛋中获得免疫的有效系统存在需要。

在此方面，已经探索了新的病毒血清型，目的是发现备选的相容性病毒载体以改进在动物中、特别是在家禽中的接种，允许稳定的蛋白表达和有效的保护作用。

WO2014/0036735论述了鸭肠炎病毒在鸡中的可能用途。DEV天然感染鸭或鹅，但对鸡没有已知的向性。该文献提示，DEV构建体可通过肌内注射给予1周龄的鸡。然而在此文献中，仅报道了晚期给予。

然而通过用DEV进行进一步的实验，发明人发现，当给予幼小的鸡(3天或更小)或在胚蛋中给予时，这样的病毒是致死的。令人惊讶地，尽管在孵化后1周向鸡给予野生型DEV(或含有所有天然基因的DEV构建体，如WO2014/0036735中所提议的)显示耐受良好，但在孵化后第1天或在胚蛋中给予这样的构建体导致极大量的动物死亡(即，80-100％)。甚至更令人惊讶地，发明人已能够修饰DEV的结构以产生DEV构建体，所述构建体可用于家禽，包括非常早期阶段(3天或更小)或在胚蛋中，和可导致在体内实质的和早期阶段的蛋白表达。这样的病毒因此代表了用于接种家禽的新的有效载体。

发明简述

本发明提供了适合于在动物、特别是家禽中，包括非常早期阶段(即，在孵化后第3天或更早，以及在胚蛋中)体内表达基因或蛋白的新的病毒构建体。特别地，本发明提供了通过UL4基因失活获得的新的DEV，和证实了这样的DEV(i)在体内、特别是在鸡中是减毒的，和(ii)是稳定的并能够以适合于诱导保护性免疫的方式表达外源基因。因为这样的DEV对例如鸡没有已知的自然向性，使用这样的DEV构建体以接种鸡对未接种的动物不涉及传播或污染的风险。此外，鸡没有抗DEV的母体抗体或免疫力，并且本发明的病毒可用于在接种的动物中诱导非常早期的免疫启动。令人惊讶地，如之前所示的，尽管野生型DEV在幼小的鸡中或在胚蛋中是致死的，但本发明的DEV是安全的，并可在体内有效地表达目的基因。这样的新的DEV因此代表了用于接种非人动物、特别是家禽和用于赋予早期保护性免疫的非常有效的载体。