[发明专利]流感效力试验

说明书

本申请公开了用于流感疫苗稳定性指示的效力试验。

本申请要求欧洲专利申请号15175765.5(2015年7月7日提交)和欧洲专利申请号16152829.4(2016年1月26日提交)的权益，这两项申请的全部内容出于所有目的通过引用纳入本文。

发明领域

本发明主要涉及疫苗，更具体的涉及用于流感疫苗的试验。

背景技术

近期流感的爆发强调了对于快速生产和投放足量流感疫苗以保护公众远离该疾病的需求，该疾病具有潜在致命的并发症。

灭活流感疫苗中血细胞凝集素(HA)含量的标准试验是基于单径向免疫扩散(“SRID”)(参考文献：1和2)，WHO在1978年建议用其替代基于红细胞凝集的试验。

尽管所述SRID试验已良好建立，但其进行缓慢、动态范围差、具有显著变异性，且制备并校准所需特异性抗HA血清需要很长时间。由于疫苗中流感毒株每个季节都会改变，这使得流感疫苗批次投放产生了瓶颈，因为这些参照试剂需要针对各毒株改变进行制备和校准。在需要尽快的制备流感疫苗的流感爆发情况下，这尤其成问题。

SRID试验的另一个缺点是，其可能无法可靠区分流感血细胞凝集素(HA)抗原的免疫活性形式与那些不是免疫原性的HA，因为试验中使用的抗血清可能不是完全特异性的并且可能与两种形式反应，尽管通常认为这样的抗血清能经调整以在SRID试验中优先识天然的、免疫原性的形式(参考文献125)。由于流感疫苗的免疫原性(因此，免疫保护性)是由免疫活性HA的量所确定，因此需要能够特异性地测量HA的免疫活性形式的试验。

参考文献3提出了SRID试验的一种替代方法，其中超滤后进行反向高压液相色谱(RP-HPLC)，并且参考文献4和5教导了基于高压液相色谱(HPLC)的试验。参考文献6和7开发了基于定量质谱的试验。这些试验可以准确地定量总HA，并且并不依赖于毒株特异性的抗血清，但是其无法区分免疫活性的HA和失活的HA。尽管ELISA试验能够特异性地定量免疫活性的HA，但是其依赖于生产毒株特异性抗体(参考文献8)，而这大大增加了疫苗可投放之前所需的时间。

发明内容

本发明包括用存在的流感效力试验鉴定问题的来源。因此，本发明(至少部分)是基于这样的认识，即用于定量疫苗生产的流感病毒抗原的常规方法无法准确地测量包括在疫苗中作为免疫原的流感病毒蛋白质的量。本文和其它地方所呈现的工作指出，分离的流感病毒蛋白可以在体外免疫试验中作为抗原，但是不可以作为功能性免疫原以引发体内免疫应答。人们迫切需要区别测量流感蛋白的这些功能和结构上不同的形式，从而可以制造流感疫苗以反映其中所包含功能性免疫原的精确量。为此，本公开的发明人研究开发了一种基于生物物理测量(作为免疫化学测量的对照)的试验以区分活性、免疫原性结构和其失活对应物之间的构象差异。该方法的原理包括：i)更直接地评估蛋白质/抗原本身；ii)可以进行这些试验的速度；iii)可以同时处理具有多个抗原的样品的简便性；和/或，iv)无需依赖于对应的抗血清(特别是，绵羊抗血清)的可用性。

因此，本文所提供的方法使得疫苗生产商准确地指示其各疫苗中包含了多少免疫原性抗原，而不仅仅只显示包括在产品中的蛋白质总量。从公共卫生的角度来看这是很重要的，因为需要确定存在多少免疫原性HA，并且还希望知道疫苗中存在多少非功能性HA，并且因为其有助于将焦点更多地关注于疫苗的纯度和效率。

因此，本发明的一个目的是提供比传统SRID试验更快的流感效力试验，并且还提供一种在流感疫苗中对免疫活性HA量更可靠的评估。