[发明专利]屏障功能测量

权利要求书

1.一种用于测定试验化合物对上皮屏障功能的调节作用的体外方法，所述方法包括以下步骤

a)提供包含多个中空微流体通道的微流体系统，其中所述通道至少部分用凝胶填充；

b)将上皮细胞引入所述微流体通道，并允许所述上皮细胞接触所述凝胶；

c)培养引入所述微流体通道的所述上皮细胞，由此允许所述细胞在所述凝胶上形成具有顶侧和基底侧的细胞层；

d)向所述微流体通道中的所述上皮细胞提供探针和所述试验化合物，其中所述探针和所述试验化合物独立地提供至所述顶侧、所述基底侧、或所述顶侧和所述基底侧两者；

e)在至少两个时间点测定由所述微流体通道中、或所述凝胶中、或所述微流体通道和所述凝胶两者中的所述探针提供的信号。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤c)中允许细胞在所述微流体通道中形成具有腔侧和基底外侧的管状结构。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法进一步包括以下步骤

f)从步骤e)中得到的所述信号测定，从向所述上皮细胞提供所述试验化合物和/或所述探针的时间点至达到所述微流体通道中和/或所述凝胶中的荧光的预定值或值的预定变化的时间点、或者到达到所述微流体通道中和所述凝胶中的荧光之比的预定值或值的预定变化的时间点所经过的时间。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法对多于一种浓度的所述试验化合物进行。

5.根据权利要求1所述的方法，其中试验化合物对所述上皮屏障功能的作用在多于一个的包含培养的上皮细胞的所述微流体通道中同时测定。

6.根据权利要求1所述的方法，其中在多个包含培养的上皮细胞的所述微流体通道的至少部分中独立地同时测定多于一种试验化合物对所述上皮屏障功能的作用。

7.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤d)之前或同时干扰所述屏障功能。

8.根据权利要求1所述的方法，其中在所述探针之前、之后或同时向所述细胞提供所述试验化合物。

9.根据权利要求1所述的方法，其中步骤c)中培养的细胞形成单层，其中所述单层不允许所述探针从顶侧向基底侧和/或从基底侧向顶侧扩散。

10.根据权利要求1所述的方法，其中步骤e)中所述至少两个时间点中的两个连续时间点彼此在1秒至24小时内。

11.根据权利要求1所述的方法，其中步骤e)中的所述至少两个时间点在10分钟-4周之间的并且包括10分钟-4周的时段内。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述凝胶附近存在与所述凝胶接触的其他通道，其中所述通道不与包含培养的上皮细胞的所述微流体通道直接接触。

13.根据权利要求12所述的方法，其中在所述其他通道中存在将所述探针从所述凝胶移除的流。

14.根据权利要求12所述的方法，其中在所述其他通道中存在将所述探针从所述凝胶移除的流，和其中在步骤e)中所述凝胶中的由所述探针提供的信号的测定包括测量所述其他通道中存在的所述流中的信号。

15.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤b)中，将不同类型的上皮细胞引入相同的微流体通道，和/或其中在步骤b)中，不同的微流体通道提供有不同类型的上皮细胞。

16.根据权利要求1所述的方法，其中所述凝胶为基底膜提取物、胞外基质组分、胶原、胶原I、胶原IV、纤连蛋白、层粘连蛋白、玻连蛋白、D-赖氨酸、巢蛋白、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖，或其组合。