[发明专利]用于SNP基因分型的方法和装置

权利要求书

1.一种对核酸样品中的一个或多个单核苷酸多态性(SNP)进行基因分型的体外方法，所述方法包括：

a)扩增含有待基因分型的SNP的所述核酸的一个或多个区域，扩增产物包含能够直接或间接地产生可检测信号的标记物，以及

b)使用侧流测定装置分析在步骤(a)中获得的扩增产物，所述侧流测定装置包含反应区，所述反应区包含固定化在不同位点上的一种或多种核苷酸探针、优选地至少两种核苷酸探针，每种探针具有与待基因分型的SNP的等位基因变体互补的序列，

在所述探针固定化位点处检测到信号指示所述核酸包含对所述探针特异的等位基因变体。

2.权利要求1的方法，其中所述扩增通过不对称PCR、优选地通过LATE–PCR来进行。

3.权利要求1或2的方法，其中所述核酸的几个区域的同时扩增通过多重PCR来进行。

4.前述权利要求任一项的方法，其中所述扩增产物是5’–标记的，优选地通过在所述扩增期间使用5’–标记的引物进行5’–标记。

5.前述权利要求任一项的方法，其中所述扩增产物用有色、发光、荧光、磷光或放射活性化合物，用酶或配体/抗配体对的第一个成员，优选地用生物素来标记。

6.前述权利要求任一项的方法，其中所述侧流测定装置包含：

多孔基质，其包含：

(i)迁移缓冲液施加区，

(ii)扩增产物施加区，其位于所述迁移缓冲液施加区下游，和

(iii)反应区，其位于所述扩增产物施加区下游，以及

(iv)任选的试剂迁移监测区，其位于所述反应区下游，和/或

(v)任选的标记区，其包含对能够直接或间接地产生可检测信号的扩增产物标记物特异的底物或结合配偶体，所述标记区位于所述迁移缓冲液施加区下游和所述扩增产物施加区上游，和/或

(vi)任选的吸收垫，其位于所述反应区下游或如果存在监测区的话就位于所述监测区下游，

所述多孔基质的各个不同区与相邻的区流体连通，并且所述吸收垫与所述多孔基质流体连通。

7.前述权利要求任一项的方法，其中所述扩增产物不需初步的纯化或变性步骤，使用所述侧流测定装置直接分析。

8.前述权利要求任一项的方法，其中所述分析包括：

i)将在步骤(a)中获得的扩增产物装载到所述侧流测定装置上，

ii)在所述装置上施加迁移缓冲液，

iii)将所述装置温育，直至在所述反应区中检测到由所述扩增产物标记物直接或间接地产生的信号，和/或当存在迁移监测区时在所述迁移监测区中检测到信号，以及

iv)读取并解释结果。

9.前述权利要求任一项的方法，其中所述基质由硝酸纤维素、聚酯、玻璃纤维、纤维素纤维、聚醚砜(PES)和/或纤维素酯制成。

10.前述权利要求任一项的方法，其中所述基质包含硝酸纤维素膜。

11.权利要求10的方法，其中所述硝酸纤维素膜包含所述基质的反应区。

12.权利要求11的方法，其中所述硝酸纤维素膜还包含所述基质的扩增产物施加区和/或监测区，优选地包含所述基质的扩增产物施加区和监测区。

13.前述权利要求任一项的方法，其中所述基质的迁移缓冲液施加区和/或所述吸收垫由纤维素纤维制成。

14.前述权利要求任一项的方法，其中所述基质的标记区由玻璃纤维制成。

15.前述权利要求任一项的方法，其中所述迁移缓冲液包含用于维持中性pH的缓冲系统、一种或多种表面活性剂和/或使氢键去稳定化的一种或多种变性剂。