[发明专利]表达ETS转录因子的工程化的内皮细胞

说明书

在一些方面，本发明涉及工程化的内皮细胞，例如E4ORF1+ETV2+工程化的内皮细胞。在其他方面，本发明涉及制备这种工程化的内皮细胞的方法，以及使用这种工程化的内皮细胞的方法，例如在共培养应用中。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2015年7月20日提交的美国临时专利申请No.62/194,466的优先权权益，其内容通过引用整体并入本文。

参考引用

为了仅允许通过引用并入的那些管辖权的目的，本公开中引用的所有参考文献通过引用整体并入本文。此外，本文引用或提及的任何产品的任何制造商的说明书或目录，通过引用并入本文。通过引用结合到本文中的文件或其中的任何教导可以用于本发明的实践中。美国专利8,465,732中提供的许多一般教导可以与本发明结合使用，或者可以适用于本发明。因此，美国专利第8,465,732号的全部内容特此通过引用明确地并入本申请中。

背景技术

转录因子(TF)的E-26(ETS)-家族中的一部分，包括ETV2(Lee等人，Cellstemcell,2:497-507(2008)；Sumanas等人，Blood,111:4500-4510(2008))，FLI1(Liu等，CurrentBio.18:1234-1240(2008))和ERG(McLaughlin等人，Blood,98:3332-3339(2001))涉及调节血管发育和血管生成(De Val等人，Dev Cell,16:180-195(2009)；Sato等人，CellStructFunct,26:19-24(2001))。这些TF直接调节与内皮细胞(EC)发育和功能相关的基因的表达。成体EC表达几种ETS因子，例如FLI1，ERG(同种型1和2)、ETSJ、ETS2、Elfl、Elk1、VEZF和ETV6，而ETV2在胚胎发育期间瞬时表达，并且在成体EC中不存在(Kataoka等人，Blood,118:6975-6986(2011)；Lelievre等人，TheInternationalJournalOfBiochemistryCellBiology,33:391-407(2001))。除了在发育过程中在血管规格中起关键作用(Liu等人，CircRes,103:1147-1154(2008)；Pham等人，DevBiol,303:772-783(2007))，也已表明这些TF中的一些的瞬时表达可将多能干细胞重编程为内皮细胞或可将其他(非多能)细胞类型重编程/转分化成内皮细胞(参见例如Choi等人，Stem Cells 27,559-567(2009)，James等人，Nat.Biotech.28,161-166(2010)，Prasain等人，Nat.Biotech.32,1151-1157(2014)，Morita等人，PNAS,112,160-165(2015)，Kurian等人，Nat.Methods 10,77-83(2013)，和Ginsberg等人，Cell,151:559-575)。然而，就本发明人所知，在本发明之前，ETS家族转录因子，特别是ETV2转录因子不被认为对分化的内皮细胞或已经定位于内皮细胞谱系的内皮细胞具有作用。类似地，在本发明之前以及就本发明人的最佳知识而言，也不预期表达此类因子的内皮细胞在其支持其他细胞类型，例如干细胞和祖细胞的扩增的能力方面可能具有增强的性质。

腺病毒早期4(E4)区域含有至少6个开放阅读框(E4ORF)。之前已经显示了整个E4区域调节血管生成并促进内皮细胞的存活(参见Zhang等人(2004),J.Biol.Chem.279(12):11760-66)。先前也已经显示，在整个E4区域内负责内皮细胞中的这些生物效应的是E4ORF1序列。参见美国专利号8,465,732。另见Seandel等人(2008),“Generation of afunctional and durable vascular niche by the adenoviral E4ORF1gene,”PNAS,105(49):19288-93。

发明内容