[发明专利]通过使用免疫球蛋白片段的特异性位点进行连接的蛋白质复合物

权利要求书

1.蛋白质复合物，其包括经由非肽基聚合物连接至免疫球蛋白Fc区的生理学活性多肽，其中所述非肽基聚合物被位点特异性地连接至所述免疫球蛋白Fc区的远端处的脯氨酸，

其中所述生理学活性多肽选自粒细胞集落刺激因子衍生物，其中天然G-CSF的第17和65位处的氨基酸置换为丝氨酸；胰岛素；泌酸调节肽；胰高血糖素样肽-1(GLP-1)；毒蜥外泌肽-4；凝血因子VII；胰高血糖素；和其衍生物，和

其中所述免疫球蛋白Fc区由SEQ ID NO：1的氨基酸序列组成。

2.权利要求1所述的蛋白质复合物，其中所述非肽基聚合物的两端经由共价键通过反应基团被分别连接至所述生理学活性多肽和所述免疫球蛋白Fc区。

3.权利要求1所述的蛋白质复合物，其中所述免疫球蛋白Fc区是去糖基化的。

4.权利要求1所述的蛋白质复合物，其中所述非肽基聚合物是聚乙二醇。

5.权利要求1所述的蛋白质复合物，其中所述非肽基聚合物的反应基团选自醛基团、马来酰亚胺基团和琥珀酰亚胺衍生物。

6.权利要求5所述的蛋白质复合物，其中所述醛基团是丙醛基团或丁醛基团。

7.权利要求5所述的蛋白质复合物，其中所述琥珀酰亚胺衍生物是琥珀酰亚胺基羧甲基、琥珀酰亚胺基戊酸酯、琥珀酰亚胺基甲基丁酸酯、琥珀酰亚胺基甲基丙酸酯、琥珀酰亚胺基丁酸酯、琥珀酰亚胺基丙酸酯、N-羟基琥珀酰亚胺或琥珀酰亚胺基碳酸酯。

8.权利要求1所述的蛋白质复合物，其中所述非肽基聚合物在两端处具有作为反应基团的醛基团。

9.权利要求1所述的蛋白质复合物，其中所述非肽基聚合物在两端处分别具有作为反应基团的醛基团和马来酰亚胺基团。

10.权利要求1所述的蛋白质复合物，其中所述非肽基聚合物在两端处分别具有作为反应基团的醛基团和琥珀酰亚胺基团。

11.权利要求1所述的蛋白质复合物，其中所述非肽基聚合物的每端被连接至所述免疫球蛋白Fc区的远端处的脯氨酸和分别地所述生理学活性多肽的赖氨酸残基、组氨酸残基或半胱氨酸残基的N-端、C-端或游离反应基团。

12.权利要求1所述的蛋白质复合物，其中所述生理学活性多肽是粒细胞集落刺激因子衍生物，其中天然G-CSF的第17和65位处的氨基酸置换为丝氨酸。

13.制备权利要求1所述的蛋白质复合物的方法，其包括：

(a')通过如下制备缀合物：通过共价键将所述非肽基聚合物的一端连接至所述免疫球蛋白Fc区或所述生理学活性多肽，其以4.0至7.0的pH条件进行；

(b')分离在步骤(a')中制备的所述缀合物，并且通过共价键将所述分离的缀合物的所述非肽基聚合物的另一端连接至免疫球蛋白Fc区或所述生理学活性多肽中的另一个，其以4.0至7.0的pH条件进行；和

(c')分离在步骤(b')中制备的所述蛋白质复合物，其包括共价连接的生理学活性多肽、非肽基聚合物和免疫球蛋白Fc区，其中所述非肽基聚合物被连接至免疫球蛋白Fc片段的远端处的所述脯氨酸，

其中所述方法具有对所述免疫球蛋白Fc区远端处的脯氨酸超过90％的选择性。

14.权利要求13所述的方法，其中所述生理学活性多肽选自粒细胞集落刺激因子衍生物，其中天然G-CSF的第17和65位处的氨基酸置换为丝氨酸；胰岛素；泌酸调节肽；胰高血糖素样肽-1(GLP-1)；毒蜥外泌肽-4；凝血因子VII；胰高血糖素；和其衍生物。