[发明专利]基因编辑的猪

说明书

本发明涉及基因编辑的猪，其包括在RELA基因中的渗入的异源核酸序列。特别地，其涉及基因编辑的猪，该猪包括在家猪的RALA基因中的渗入的疣猪等位基因。本发明还涉及一种此猪的生产方法，以及来源于具有此渗入序列的猪的细胞。

技术领域

本发明涉及基因编辑的猪，其包括在RELA基因中渗入的异源核酸序列。

背景技术

传统的动物育种在整个基因组中使用序列改变。由两个动物交配获得的后代具有融合父母双方以及新生突变的基因型。在农业中，捕获的有益基因型及其编码性状具有遗传改良。这一过程耗时，需要大量杂交，并且依赖于在育种种群中存在所需的遗传变异。在育种过程中，消除的变异不可被利用。

目前，由锌指核酸酶(ZFN)法²开创的靶向基因组编辑的发展¹使得能够使用不存在于某一特定群体中的变异。这一方法依赖于人工核酸酶将双链断裂(DSB)引入到特定的靶序列。当与研究者提供的DNA模板结合使用时，在修复DSB期间，在同源重组过程中能将特定改变引入染色体中。如此，能将原靶序列换为新的序列³，使得单个等位基因能够渗入一代的靶动物群。

然而，尽管靶基因组编辑带来了希望，但是把等位基因渗入靶动物内存在巨大的挑战。特别地，将等位基因渗入家猪(野猪属)仍未成功实现。

虽然在野生物种⁵驯化过程中，已经找到单点突变来提供关键的表型差异，但是在许多情况下，认为在同一位点的多点突变负责提供关键的表型差异。代表性的，农艺中重要的例子是在RELA⁶中的变异。与在非洲发现的现存猪种对比，家猪非常容易受到非洲猪瘟病毒的感染。我们较早已经确认在疣猪(非洲疣猪)和家猪RELA⁶之间的三个氨基酸的差异。

W02014/041327描述了通过ZFNs和TALENs切割DNA后，由NHEJ构建插入/缺失，来进行猪的基因组编辑，但是并未描述等位基因渗入。

本发明已成功在猪的RELA基因中实现等位基因渗入。因此，本发明克服了相当的困难，以完成这个具有里程碑意义的成就。

发明内容

本发明人首次描述了异源核酸渗入猪基因组中；尤其是，他们已经把一个完整的单倍型疣猪RELA等位基因渗入家猪RELA基因中。此单倍型渗入家猪基因组是一个显著成就，并且得到的猪具有相当的商业效益。

根据本发明的第一个方面，提供了一种基因编辑的猪，其在RELA基因中包括渗入的异源核酸序列。

非常优选的，该猪是猪，且更优选为家猪。

RELA蛋白是NFkappaB异源二聚体转录因子的主要成分。如此，基因编辑改变了RELA的水平或活性，其将直接影响依赖于NFkappaB的细胞活性，尤其是从NFkappaB诱导基因的基因转录。NFkappaB是动物的各种应激反应如感染等的关键效应物。具有改变的RELA表达或者改变的RELA活性的基因编辑动物因此在对生物应激反应或生物创伤反应，比如感染、慢性疾病和/或自身免疫性疾病方面，，将与没有进行编辑的同类有不同的反应。

非常优选地，渗入的异源核酸序列包括异源RELA等位基因。合适地，渗入的异源等位基因包括跨物种异源RELA等位基因。可选地，渗入的异源等位基因包括跨属异源RELA等位基因。

由此，在本发明特别优选的示例中，渗入的异源等位基因把野生型RELA等位基因转换为异源RELA等位基因，更优选地，转换为跨物种异源RELA等位基因或跨属异源RELA等位基因，合适地，以及疣猪RELA等位基因。