[发明专利]贝壳杉烯酸羟化酶

权利要求书

1.具有贝壳杉烯酸13-羟化酶活性的变体多肽，所述变体多肽是如下氨基酸序列，当与SEQ ID NO: 1所示序列比对时，所述氨基酸序列包含至少一个氨基酸残基的替换，所述替换发生在对应于氨基酸位置129的氨基酸残基处，

所述位置是参照SEQ ID NO: 1限定的，其中所述变体多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:11或SEQ ID NO: 31所示，并且其中所述变体多肽与具有贝壳杉烯酸13-羟化酶活性的参照多肽相比具有一种或更多种改变的性质。

2.根据权利要求1所述的变体多肽，其中所述改变的性质是改变的贝壳杉烯酸13-羟化酶活性。

3.根据权利要求1或2所述的变体多肽，其中所述参照多肽包含SEQ ID NO: 1的贝壳杉烯酸13-羟化酶。

4.根据权利要求1或2所述的变体多肽，其中所述变体多肽是非天然存在的多肽。

5.编码根据前述权利要求中任一项所述的变体多肽的核酸。

6.核酸构建体，其包含权利要求5所述的核酸，所述核酸与能够指导贝壳杉烯酸13-羟化酶在合适表达宿主中表达的一种或更多种控制序列可操作地连接。

7.表达载体，其包含根据权利要求5所述的核酸或根据权利要求6所述的核酸构建体。

8.重组宿主，其包含根据权利要求5所述的核酸、根据权利要求6所述的核酸构建体或根据权利要求7所述的表达载体。

9.根据权利要求8所述的重组宿主，其能够产生甜菊醇或甜菊醇糖苷。

10.根据权利要求9所述的重组宿主，其包含一种或更多种编码以下多肽的重组核苷酸：

具有对映-柯巴基焦磷酸合酶活性的多肽；

具有对映-贝壳杉烯合酶活性的多肽；

具有对映-贝壳杉烯氧化酶活性的多肽；或

具有贝壳杉烯酸13-羟化酶活性的多肽，其不同于根据权利要求1-4中任一项所述的变体多肽。

11.根据权利要求9所述的重组宿主，其包含编码具有NADPH-细胞色素p450还原酶活性的多肽的重组核酸。

12.根据权利要求9所述的重组宿主，其包含编码以下项中的一种或更多种的重组核酸：

（i）具有UGT74G1活性的多肽；

（ii）具有UGT2活性的多肽；

（iii）具有UGT85C2活性的多肽；和

（iv）具有UGT76G1活性的多肽。

13.根据权利要求8所述的重组宿主，其中所述宿主属于Saccharomyces、Aspergillus、Pichia、Kluyveromyces、Candida、Hansenula、Humicola、Issatchenkia、Trichosporon、Brettanomyces、Pachysolen、Yarrowia、Yamadazyma或Escherichia属中的一种。