[发明专利]在高温下表达和分泌异源蛋白的酵母菌株

权利要求书

1.一种包含异源核酸分子的重组酵母宿主细胞，所述异源核酸分子具有可操作地连接至编码第一异源蛋白的第一核酸分子的第一启动子，其中：

-当与相应的第一天然异源蛋白相比时，所述第一异源蛋白包含至少一个氨基酸取代，所述氨基酸取代维持或提高了所述重组酵母宿主细胞在高温下的稳健性；和/或

-当与所述重组酵母宿主细胞置于至少部分需氧条件下获得的所述第一异源蛋白的表达水平相比时，当所述重组酵母宿主细胞处于至少部分厌氧条件下时，所述第一启动子能够增加所述第一异源蛋白的表达。

2.如权利要求1所述的重组酵母宿主细胞，其中所述异源核酸分子还包含第二启动子，当所述重组酵母宿主细胞处于至少部分厌氧条件下时所述第二启动子能够增加所述第一异源蛋白的表达，并且其中所述第二启动子可操作地连接至所述第一核酸分子。

3.如权利要求1或2所述的重组酵母宿主细胞，其中所述第一启动子和所述第二启动子选自由以下组成的组：tdh1p、pau5p、hor7p、adh1p、tdh2p、tdh3p、gpd1p、cdc19p、eno2p、pdc1p、hxt3p及tpi1p。

4.如权利要求3所述的重组酵母宿主细胞，其中所述第一启动子和所述第二启动子是pau5p和tdh1p。

5.如权利要求1至4中任一项所述的重组酵母宿主细胞，其中所述第一异源蛋白当与相应的第一天然异源蛋白相比时包含引入推定的糖基化位点的第一氨基酸取代。

6.如权利要求5所述的重组酵母宿主细胞，其中所述第一氨基酸取代位于所述第一异源蛋白的N末端区域中。

7.如权利要求5或6所述的重组酵母宿主细胞，其中所述第一氨基酸取代在所述第一异源蛋白中引入天冬酰胺残基作为所述推定的糖基化位点。

8.如权利要求1至7中任一项所述的重组酵母宿主细胞，其中所述第一异源蛋白是裂解酶。

9.如权利要求8所述的重组酵母宿主细胞，其中所述裂解酶是糖解酶。

10.如权利要求9所述的重组酵母宿主细胞，其中所述第一异源蛋白是葡萄糖淀粉酶。

11.如权利要求10所述的重组酵母宿主细胞，其中所述相应的第一天然蛋白具有SEQID NO:1的氨基酸序列。

12.如权利要求11所述的重组酵母宿主细胞，其中所述第一异源蛋白具有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的氨基酸序列。

13.如权利要求9所述的重组酵母宿主细胞，其中所述第一异源蛋白是α-淀粉酶。

14.如权利要求13所述的重组酵母宿主细胞，其中所述相应的第一天然蛋白具有SEQID NO:6的氨基酸序列。

15.如权利要求14所述的重组酵母宿主细胞，其中所述第一异源蛋白具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列。

16.如权利要求1至15中任一项所述的重组酵母宿主细胞，其是来自于酵母属(genusSaccharomyces)。

17.如权利要求16所述的重组酵母宿主细胞，其是来自于酿酒酵母种(speciesSaccharomyces cerevisiae)。