[发明专利]细菌快速试验

说明书

本发明涉及用于定量地测定细菌的方法和装置。

本发明涉及用于定量地测定细菌的方法和装置。

军团菌属于革兰氏阴性细菌类别。关于其增殖的最佳条件是在水中在25-50℃的温度范围内。它们可以存在于用于热水产生和分配的设备中，存在于具有长的停用时间的游泳池、用于空调设备的空气净化器、冷却塔、水箱和水管中。吸入以气溶胶形式的含军团菌的水，例如在淋浴的情况下、在空调设备的情况下、通过草地喷水器或在涡流式沐浴器中，可以在人中导致感染，其可以引起一种危险的、在多数情况下致命的疾病，“军团菌病”。

因此，德国饮用水条例规定了对于军团菌的定期检验义务，这涉及具有用于饮用水加热的大型设备的饮用水设施的所有者，如果从该饮用水设施给出水并且与此同时发生其雾化，例如在淋浴中。该规定尤其适用于医院、学校、幼儿园、旅馆和护养院。这些机构有义务每年一次进行对于军团菌的检验。最近以来，多户住宅的业主或房东、住房建筑公司和物业管理部门也必须以各自三年的间隔进行相应的检验。

在饮用水条例中，对于军团菌规定了100个菌落形成单位(CFU)/100ml的技术措施值。如果在检验时确定超过了该值，那么必须立即向主管卫生局报告。

检验义务范围内的分析借助于常规的微生物学检测方法来进行。将待检验的饮用水样品在实验室中分配开，并且以两份平行的批料按照ISO 11731(1998)和DIN EN ISO11731-2(2008)进行检验。将起始样品的一部分作为直接批料和将另一部分在过滤后涂布在具有琼脂培养基的培养皿中。将来自所述两种批料的琼脂平板在36±2℃的恒定温度下在培养箱中温育十天。然后，对在温育期间生长处的军团菌菌落进行计数和评价。定量结果以关于100ml样品而言的“菌落形成单位(CFU)”来给出。

为了证实独特的军团菌菌落，将至少五个菌落不仅在含半胱氨酸的培养基上而且还在不含半胱氨酸的培养基上平行地传代培养至少两天。由于氨基酸半胱氨酸对于军团菌来说是必需的，如果菌落在含半胱氨酸的培养基上生长，但在不含半胱氨酸的培养基上不生长，那么该检测被认为得到证实。

上面所提及的分析的一个缺点在于，所述微生物学检测方法是昂贵的和耗时的。所述方法的另一个缺点在于，由此获得的结果具有在大约15％和35％之间的不准确性。

因此，作为本发明基础的任务在于，提供经改善的用于定量地测定军团菌和其他细菌的方法，其中可以至少部分地避免现有技术的缺点。特别地，所述方法应当允许具有高精确性的明显更快速的测定。

为了解决该任务，提供了新的用于定量地检测细菌的方法和装置。本发明基于测量经标记的细菌，其中所获得的测量信号与在样品中存在的细菌的总数目相关。细菌的检测可以例如通过发光辐射、荧光辐射或拉曼辐射来进行。

本发明的第一个方面涉及用于定量地测定样品中的细菌的方法，其包括下列步骤：

(a)将待检验的样品与能与待测定的细菌相结合的标记试剂一起进行温育，所述标记试剂优选地选自荧光标记试剂、发光标记试剂和拉曼标记试剂，

(b)通过对于所述待测定的细菌来说不可渗透而对于所述标记试剂来说可渗透的膜，从细菌上去除未与细菌相结合的标记试剂，其中所述待测定的细菌被收集在所述膜上，

(c)测定与所收集的细菌相结合的标记试剂，优选地通过发光测量、荧光测量和/或拉曼测量，和

(d)定量地评价来自步骤(c)的测量信号。

根据本发明的方法允许快速地且定量地测定样品中的细菌。所述方法可以在取样后直接进行，而无需事先培养待测定的细菌。对于标记试剂与细菌结合来说所需的温育时间优选地在一秒钟至最大五分钟，特别优选地直至最大2.5分钟的范围内。这导致，可达到少于十分钟，优选地少于五分钟的总测量时间。