[发明专利]用于实体瘤靶向的双特异性CAR T细胞

权利要求书

1.一种细胞，所述细胞包含：第一嵌合抗原受体(CAR)，所述第一CAR包含对B细胞特异性细胞表面配体具有特异性的第一配体结合结构域；以及第二CAR，所述第二CAR包含对实体瘤细胞表面癌抗原具有特异性的第二配体结合结构域，其中，

所述第一配体结合结构域对CD19具有特异性并且由SEQ ID NO：12的核苷酸序列编码；

所述第二配体结合结构域对L1CAM或ROR1具有特异性并且由SEQ ID NO：16或SEQ IDNO：18的核苷酸序列编码；以及

所述第一CAR和所述第二CAR各自包含4-1BB信号传导结构域和CD3-ζ信号传导结构域。

2.如权利要求1所述的细胞，其中所述第二配体结合结构域对L1CAM具有特异性并且由SEQ ID NO：16的核苷酸序列编码。

3.如权利要求1所述的细胞，其中所述第二配体结合结构域对ROR1具有特异性并且由SEQ ID NO：18的核苷酸序列编码。

4.如权利要求1-3中任一项所述的细胞，其中所述第一CAR和/或所述第二CAR在所述细胞中是诱导型表达的。

5.如权利要求1所述的细胞，其中，第一标记蛋白与所述第一CAR共表达；和/或第二标记蛋白与所述第二CAR共表达。

6.如权利要求5所述的细胞，其中，所述第一标记蛋白和所述第二标记蛋白彼此不同，并且选自于Her2tg多肽或EGFRt多肽。

7.如权利要求1所述的细胞，其中所述4-1BB结构域包含SEQ IDNO：7中所示的氨基酸序列。

8.如权利要求1所述的细胞，其中所述CD3-ζ结构域包含SEQ IDNO：9中所示的氨基酸序列。

9.如权利要求1所述的细胞，所述细胞进一步包含编码自杀基因系统的核酸。

10.如权利要求9所述的细胞，其中所述自杀基因系统为单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSVTK)/更昔洛韦(GCV)自杀基因系统或可诱导的半胱天冬酶自杀基因系统。

11.如权利要求1所述的细胞，其中所述细胞表达用于治疗的可溶性蛋白。

12.如权利要求11所述的细胞，其中所述可溶性蛋白为稳态细胞因子，所述稳态细胞因子选自于IL2、IL7、IL12或IL15。

13.如权利要求1所述的细胞，其中所述细胞为T细胞。

14.如权利要求13所述的细胞，其中所述细胞为CD8+T细胞或CD4+T细胞。

15.如权利要求14所述的细胞，其中所述细胞为选自于由以下细胞组成的组中的CD8+T细胞毒性淋巴细胞：初始CD8+T细胞、CD8+记忆T细胞、中枢记忆CD8+T细胞、调节性CD8+T细胞、IPS衍生CD8+T细胞、效应记忆CD8+T细胞和混合CD8+T细胞。

16.如权利要求14所述的细胞，其中所述细胞为选自于由以下细胞组成的组中的CD4+T辅助淋巴细胞：初始CD4+T细胞、CD4+记忆T细胞、中枢记忆CD4+T细胞、调节性CD4+T细胞、IPS衍生CD4+T细胞、效应记忆CD4+T细胞和混合CD4+T细胞。

17.制备如权利要求1-16中任一项所述的细胞的方法，所述方法包括：

将编码所述第一CAR的第一核酸和编码所述第二CAR的第二核酸导入细胞中；

扩增包含所述第一核酸和所述第二核酸的所述细胞；以及

分离表达所述第一CAR和所述第二CAR的所述细胞。