[发明专利]纯化血小板的制造方法

说明书

本发明提供一种方法，其是从巨核细胞的培养物制造纯化血小板的方法，包括利用150×g～550×g的离心力将上述培养物离心分离的第一离心分离工序以及利用600×g～4000×g的离心力将在第一离心分离工序中回收得到的液体成分离心分离的第二离心分离工序。

技术领域

本发明涉及从巨核细胞的培养物制造纯化血小板的方法等。

背景技术

对于随着手术时、受伤时的大量出血、或者表现出抗癌剂治疗后的血小板减少而出血趋势的患者而言，出于治疗和预防其症状的目的，向患者给予血小板制剂。目前，血小板制剂的制造依赖于通过健康志愿者进行的献血。但是，在日本，因人口结构而引起献血者数量减少，推测在2027年，存在大约100万人份的献血缺口。因此，血小板的稳定供给是本技术领域的重要课题。

另外，由于现有的血小板制剂因细菌污染导致的风险高，所以可能在血小板制剂的注入后引起严重感染。因此，在临床实践中，始终寻求更安全的血小板制剂。为了满足这种需求，如今开发了从在体外(in vitro)培养出的巨核细胞中产生血小板的方法。

在输入血小板制剂时，极少数情况下会发生输血副作用(荨麻疹、过敏反应等)。认为其原因之一在于血小板制剂中含有的血浆。因此，为了预防输血副作用，开发了用人工制备出的溶液(洗涤保存液)置换血小板制剂中的血浆的方法。例如，为了洗涤浓缩血小板制剂中的血小板，有使用具备分离转鼓的离心分离装置来洗涤血小板的方法。这里所说的浓缩血小板制剂是通过血液成分采集，除去白细胞的大部分，并将采集到的血小板悬浮在血浆中而得到的。

另一方面，在体外培养巨核细胞而产生血小板的情况下，需要将血小板从巨核细胞分离并浓缩。由于两者的表面标记物相同，所以无法用细胞分选仪分离，为了分离血小板与巨核细胞，使用了利用大小差异而用过滤器和/或中空纤维膜分离的方法、使用离心管进行离心分离的方法。但是，在使用过滤器和/或中空纤维膜的方法中，因为表面蛋白质的损伤等而导致血小板的生理活性丧失，并且回收率低至10％左右。另外，在使用离心分离的方法中，由于采用低的离心速度以使得功能不降低，所以巨核细胞的去除率低，血小板回收率也仅为10％左右，另外，存在一次性能够纯化的量受到离心管的容积限制的问题。

发明内容

技术问题

本发明的课题在于提供以高的回收率且一次性大量地从巨核细胞的培养物中分离纯化血小板来制造高品质的纯化血小板的方法。

技术方案

本发明人等为了解决上述课题反复进行了研究，结果发现，在利用预定的离心力将巨核细胞的培养物离心处理之后，通过利用更高的离心力对在该离心处理中得到的液体成分再一次进行离心处理，从而能够以高回收率从巨核细胞的培养物中纯化出高品质的血小板。

即本发明提供：

〔1〕一种方法，是从巨核细胞的培养物制造纯化血小板的方法，包括：

第一离心分离工序，利用150×g～550×g的离心力将上述培养物离心分离；以及

第二离心分离工序，利用600×g～4000×g的离心力将在第一离心分离工序中回收得到的液体成分离心分离；

〔2〕根据〔1〕中记载的方法，上述离心分离工序通过离心分离来实施，上述离心分离装置具备：

能够旋转的分离转鼓，其具备根据离心力使比重大的物质附着的内壁和使分离后的液体成分流出的流出口；以及

回收单元，其对从上述流出口流出的液体成分进行回收。

〔3〕根据〔2〕中记载的方法，上述方法还包括：

洗涤工序，在上述第二离心分离工序之后，向上述分离转鼓加入洗涤液并使其旋转；以及