[发明专利]生成人内耳感觉上皮和感觉神经元的方法有效
| 申请号： | 201680061915.0 | 申请日： | 2016-10-21 |
| 公开（公告）号： | CN108291197B | 公开（公告）日： | 2022-09-16 |
| 发明（设计）人： | 卡尔·R·克勒;埃里·哈希诺 | 申请（专利权）人： | 印第安纳大学研究与技术公司 |
| 主分类号： | C12N5/02 | 分类号： | C12N5/02;C12N5/0793;C12N5/0797;C12N5/22 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 郑斌;刘振佳 |
| 地址： | 美国印*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 生成 内耳 感觉 上皮 神经元 方法 | ||
1.获得包含人内耳感觉组织的三维组合物的方法，其包括以下步骤：
(a)在包含FGF-2、骨形态生成蛋白(BMP)和转化生长因子β(TGFβ)信号传导小分子抑制剂的培养基中培养人多能干细胞聚集体4天，所述骨形态生成蛋白(BMP)包含BMP-4，所述转化生长因子β(TGFβ)信号传导小分子抑制剂包含SB431542；
(b)在成纤维细胞生长因子(FGF)和BMP信号传导抑制剂的存在下进一步培养(a)的经培养的聚集体4天，所述BMP信号传导抑制剂包含LDN-193189；和
(c)使(b)的经进一步培养的聚集体接触Wnt激动剂4天，其中所述Wnt激动剂是GSK3抑制剂，由此经接触的聚集体内的细胞分化成耳前上皮细胞；
(d)将步骤(c)中获得的耳前上皮细胞包埋在包含含有基底膜提取物的细胞外基质蛋白的半固体培养基中；以及
(e)在Wnt激动剂的存在下培养所包埋的耳前上皮细胞6天；
(f)在促进所包埋的耳前上皮细胞自组装成耳泡的条件下，再培养(e)的所包埋的耳前上皮细胞至少22至42天，由此获得包含人内耳感觉组织的三维组合物。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述FGF是FGF-2。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述GSK3抑制剂选自CHIR99021、氯化锂(LiCl)和6-溴靛玉红-3’-肟(BIO)。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述三维组合物包含一种或更多种机械感觉细胞。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述三维组合物包含一种或更多种感觉神经元细胞。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述三维组合物包含一种或更多种与机械感觉细胞形成突触连接的感觉神经元细胞。
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