[发明专利]颗粒的蛋白质固定方法

说明书

本发明涉及一种将蛋白质固定在颗粒上的方法，更具体地涉及一种将抗体固定在磁性颗粒上的方法。本发明将蛋白质固定在颗粒上的方法特征在于不存在由蛋白质‑蛋白质以及蛋白质‑颗粒的非特异性结合而导致的蛋白质聚集，从而可以将相对少量的蛋白质固定在颗粒上。

技术领域

本发明涉及一种将蛋白质固定在颗粒上的方法，更具体地涉及一种将抗体固定在磁性颗粒上的方法。

背景技术

用于免疫色谱分析的固定有蛋白质的颗粒在医疗保健领域中用于鉴定疾病或检测疾病的变化，并且在包括食品和生物处理领域、环境领域等在内的各领域中还用于简单地分析少量分析物。具体而言，在医疗保健领域，其应用范围扩大到怀孕、排卵、传染病、药物滥用、急性心肌梗塞、癌症等。例如，上述颗粒可用于分离血液中的疾病标志物。

在这些颗粒中，由于易于控制、高生物相容性和高灵敏度等优点，磁性颗粒作为用于结合化验的标记材料备受关注。例如，韩国专利申请2014-0106268公开了一种使用磁性颗粒检测生物分子的方法。

同时，将蛋白质固定在颗粒上的方法以颗粒表面被改性以使羧基(-COOH)固定在颗粒表面上，随后通过与蛋白质的氨基(-NH₂)酰胺键合的方式进行固定。作为上述方法的代表性实例，已知一种使用可从Thermo公司获得的Magnabind将蛋白质固定在颗粒上的方法，以及一种使用可从生命技术公司(Life Technology)获得的Dynabeads Myone^TM将蛋白质固定在颗粒上的方法。然而，Thermo和Life Technology的蛋白质固定方法的问题在于由于非特异性结合而可能形成蛋白质-蛋白质聚集体或蛋白质-颗粒聚集体，并且LifeTechnology的方法具有处理时间长的缺点。因此，仍然需要一种能够克服这些缺点的将蛋白质固定在颗粒上的方法。

发明内容

技术问题

因此，本发明旨在提供一种将蛋白质固定在颗粒上的方法，其中，可以固定相对少量的蛋白质，同时解决现有技术中遇到的问题，例如处理时间长和由蛋白质之间以及蛋白质和颗粒之间的非特异性结合所导致的聚集。

技术方案

因此，本发明提供了一种将蛋白质固定在颗粒上的方法，包括：对颗粒表面进行改性以使羧基(-COOH)固定在颗粒表面上；对经改性的颗粒进行蛋白质添加，然后超声处理；和在超声处理后通过添加用于促进固定在颗粒表面上的羧基与蛋白质的氨基(-NH₂)之间的酰胺键合的催化剂，将蛋白质固定在颗粒表面上，其中，在将蛋白质固定在颗粒表面上的过程中，进行超声处理，从而防止蛋白质之间或蛋白质与磁性颗粒之间的非特异性吸附。

在本发明的另一实施方式中，在对颗粒表面进行改性之后并且在对经改性的颗粒进行蛋白质添加，然后超声处理之前，可以对经改性的颗粒进行超声处理。

在本发明的又一实施方式中，在将蛋白质固定在颗粒表面上的过程中，可以将表面活性剂与用于促进酰胺键合的所述催化剂一起加入。

在本发明的又一实施方式中，所述颗粒可以是磁性颗粒。

在本发明的又一实施方式中，所述颗粒可以具有范围为100nm～3μm的尺寸。

在本发明进一步的实施方式中，所述蛋白质可以是抗体，并且所述抗体可以通过固定在颗粒表面上的羧基与抗体重链恒定区的氨基(-NH₂)之间的酰胺键合固定在所述颗粒上。

在本发明又进一步的实施方式中，用于促进酰胺键合的所述催化剂可以是选自由EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)、CDI(N,N'-羰基二咪唑)和DOC(二环己基碳二亚胺)组成的组中的至少一种。

有益效果