[发明专利]基于脂肪来源的干细胞的干细胞疗法

说明书

本发明涉及源自脂肪来源的干细胞(ASC)和组合物，以及制备这种ASC和组合物的方法以及将其用于治疗的用途。

技术领域

本发明涉及脂肪来源的干细胞(ASC)和组合物，以及制备这种ASC和组合物的方法以及将其用于治疗的用途。

背景技术

许多临床前研究已经证实来自骨髓以及脂肪组织的间充质基质细胞(MSC)具有很强的再生能力。来自两种组织来源的间充质基质细胞通过旁分泌机制改善再生，该旁分泌机制释放促进天然内源性修复机制的胞外物质，天然内源性修复机制包括基质重塑、血管再生和免疫调节。

已经证明MSC在治疗严重的稳定性冠状动脉疾病和顽固性心绞痛以及慢性缺血性心力衰竭方面是安全有效的(例如，Mathiasen等，2012；Mathiasen等，2013)。用ASC治疗慢性心肌缺血的临床安全性同样也有记载(Qayyum等，2012；Ekblond，2015)。由于其抑制或阻止树突细胞成熟以及T细胞、B细胞和NK细胞增殖的能力，MSC也具有免疫抑制特性，并且正在探索用于治疗多种自身免疫性或其他炎症性病症(Gebler等，2012；Wang等，2014)。

然而，目前的ASC制造方法和临床组织工作不够理想，阻碍了这类治疗的广泛传播。因此，需要安全高效的方法来制造和保存适用于广泛的治疗应用的高质量同种异体(allogenic)ASC制剂。

WO2014/203267(Kaziak Research PVT Ltd.)涉及一种用于人脂肪组织来源的MSC的分离、纯化和工业规模扩增的方法及其在治疗I型糖尿病、严重肢体缺血和其他病症中的用途。

WO 2006/037649(Cellerix S.L.和Universidad Autónoma de Madrid)涉及从非骨软骨间充质组织识别和分离多能细胞，其特征在于某些标记物。

尽管本领域有这些和其他的进展，但仍需要新的用于ASC的制造和配制技术。

发明内容

本发明人已经发现，可以高效地产生并在高浓度下在无蛋白质的冷冻保护剂中冷冻高质量ASC“现成(off-the-shelf)”制剂。当将冷冻的ASC制剂解冻时，其随时可供临床使用。此外，ASC制剂具有免疫抑制特性，使其适用于自体(autologous)和同种异体使用，例如免疫抑制疗法。

因此，本发明的第一方面涉及制备包含基本上同质的成人干细胞群体的组合物的方法，其包括一个或多个以下步骤：

(i)将从供体收集的脂肪抽吸物(lipoaspirate)的基质血管部分(SVF)加入到生物反应器中，任选地生物反应器中表面经过预处理以促进ASC的粘附；

(ii)在生物反应器中，在补充有人血小板裂解物的无血清培养基中培养粘附细胞至汇合；

(iii)分离粘附细胞；

(iv)以至少1×10⁶个细胞/mL的浓度在冷冻保护剂中冷冻分离的细胞；

(v)使冷冻的细胞解冻并将步骤(ii)和(iii)以及任选的(iv)重复至少一次，

(vi)以至少1×10⁷个细胞/mL的浓度冷冻分离的细胞；和；

(vii)任选地，使冷冻的组合物解冻。

第二方面，本发明涉及一种组合物，例如药物组合物，其包含基本上同质的成人干细胞群体(分离自从供体收集的脂肪组织)在无蛋白质的冷冻保护剂中的混悬液，其中细胞浓度为至少1×10⁷个细胞/mL。任选地将该组合物冷冻。在一个实施方式中，组合物使用第一方面的方法制备。