[发明专利]解释Taylor色散数据的分析方法

说明书

公开了用于制备色散陡度的方法以及用于在存在竞争剂分子时确定全动力学和亲和力分析的SPR注入方法。SPR注入提供了两个或更多个样本到SPR流动池和检测器的色散陡度。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2015年9月28日提交的美国临时申请No.62/233605的权益。

背景技术

了解大生物分子何时以及以何种程度形成两个或更多个分子的聚集体对于医学治疗的发展和分子的一般理解是重要的。当前用于估计非均相(heterogeneous)溶液中的聚集体形成和聚集百分比的技术需要多个步骤。一种方法使用扩散系数的近似来确定溶液中的聚集百分比。如图3中所绘出的，扩散系数的改变可以用于生成适于估计非均相溶液中的聚集百分比的校准曲线。使用具有不同程度的已知聚集体百分比的葡聚糖溶液制备图3的斜率。

遗憾的是，许多生物分子(诸如但不限于蛋白质、DNA、肽和激素)不允许容易地制备用在如图3中所绘出的校准表中的已知聚集体标准物。因此，用于确定这些化合物的聚集形式的存在和百分比的无校准方法将对那些研究生物分子的人有用。

发明内容

本文公开了定性确定单体和聚集体的非均相混合物中聚集体的存在的方法。还公开了用于定量确定单体和聚集体的非均相混合物中聚集体的百分比的方法。还公开了用于估计构成单体和聚集体的非均相混合物中的聚集体组分的单体的数量的方法。

本发明的方法可以使用或者脉冲型或者S型注入执行，以产生用在表面等离子体共振(或SPR)分析中的Taylor色散。

本文公开了用于确定非均相溶液中单体的聚集体形式的存在的方法。该方法包括以下步骤：

识别所述溶液内的至少一种单体并确定所述单体的D_m；

确定所述溶液内的总分析物浓度(C_tot)，所述总分析物浓度包括存在于所述溶液中的单体浓度(C_m)和任何聚集体浓度(C_a)两者；

通过使用脉冲注入技术在Taylor色散条件下注入包含所述单体和聚集体的所述溶液的样本，对所述样本执行SPR分析；

在Taylor色散条件下确定SPR本体折射率(bulk refractive index)响应曲线；

使用最小二乘拟合技术，将方程#1a拟合到用于所述样本的SPR本体折射率响应曲线：

(方程#1a)

其中

C_m＝单体浓度

C_a＝聚集体浓度

C_tot＝总蛋白质浓度(单体加聚集体)

C_m＝C_tot-C_a(方程#1b)

dndc＝分析物的RII(通常为mL/mg*RU)

V_i＝样本注入体积(m³)

d＝管道直径(m)

T＝平均分析物停留时间＝L/u(s)

L＝管长(m)

u＝流体的平均速度(m/s)

k_m＝单体物质的Taylor-Aris色散系数(m²/s)