[发明专利]结合vWF的DNA适配体

说明书

本发明的目的在于提供一种针对vWF的适配体，其与现有核酸适配体相比具有更优异的结合能力、解离速率和/或稳定性。本发明通过结合vWF并含有人工碱基的DNA适配体来解决上述问题。

技术领域

本发明涉及含有人工碱基且结合vWF的DNA适配体、含有该DNA适配体的药物组合物以及使用该DNA适配体检测vWF的方法等。

背景技术

具有针对靶标分子结合活性的核酸片段称为核酸适配体，其被期待其能作为核酸药物而广泛地应用到医疗中。核酸适配体可以通过从由随机核苷酸序列构成的核酸片段文库中筛选和分离出结合靶标分子的核酸片段的体外筛选(SELEX方法)来制作。

另一方面，人们已经知道vWF是存在于血液中的凝血因子之一，其基因变异与血管性血友病等相关，针对vWF的自身抗体的产生会引发后天性血栓性血小板减少性紫癜等。目前，人们正在开发一些针对vWF的核酸适配体(非专利文献1和非专利文献2)。但是，现有的核酸适配体与由20种氨基酸组成的蛋白质抗体相比，构成的碱基种类只有4种，因此其变化有限，在结合能力、解离速率及稳定性等性能方面无法充分满足需要。因此，如果要将核酸适配体用于以治疗和诊断为代表的医疗领域，关键在于改善这些性能。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：Sadler,J.E.,1998,Annu.Rev.Biochem.,67,pp.395-424.

非专利文献2：Gilbert,J.C.et al,2007,Circulation,116,pp.2678-2686.

发明内容

发明所要解决的问题

因此，需要开发一种针对vWF的适配体，其与现有的核酸适配体相比具有更高的结合能力、解离速率和/或稳定性。

解决问题的手段

本发明人以vWF为靶标，通过实施使用本发明人开发的人工碱基对技术的两种SELEX方法(WO2013/073602中记载的预测方法和随机文库方法)而获得紧密结合vWF并含有人工碱基的DNA适配体。此外，对获得的DNA适配体进行了进一步的研究，结果发现，与现有的核酸适配体ARC1172相比，在K_D和/或k_off方面表现出优异的结合能力(例如10倍以上的低K_D和/或k_off)。此外，获得的DNA适配体具有优异的Tm值和/或耐核酸酶的特性。

本发明基于上述见解而完成的，包括以下方案。

(1)一种结合vWF蛋白的DNA适配体，其含有以下(i)或(ii)的核苷酸序列：

(i)SEQ ID NO:13～SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20中任一个所示的核苷酸序列；或者

(ii)在(i)所示的核苷酸序列中除7-(2-噻吩基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基以外的位置添加、缺失和/或置换一个或数个(1又は数個)核苷酸而成的核苷酸序列。

(2)根据(1)所述的DNA适配体，其中，(i)的核苷酸序列是SEQ ID NO:13、SEQ IDNO:14、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20所示的序列。

(3)根据(1)或(2)所述的DNA适配体，其在核苷酸序列的末端含有1～5个GC碱基对。

(4)根据(1)～(3)中任一项所述的DNA适配体，

其在核苷酸序列的3’末端还含有小发夹结构，

所述小发夹结构由从5’末端向3’末端依次连接的以下(A)～(C)的核酸区域组成：