[发明专利]生产色谱介质的方法及色谱介质

说明书

本发明涉及一种改进色谱珠的方法。更严密地说，本发明涉及一种生产含葡聚糖的多孔介质的新方法和用这种方法生产的色谱介质。在该方法中，色谱介质经历葡聚糖酶处理，导致介质的压流性质改进。

发明领域

本发明涉及一种改进色谱珠的方法。更严密地说，本发明涉及一种生产含葡聚糖的多孔介质的新方法和用这种方法生产的色谱介质。在该方法中，色谱介质经历葡聚糖酶处理，导致介质的压流性质改进。

背景

在生物技术中，最广泛使用的分离方法之一是色谱。术语色谱包括一系列密切相关的分离方法。区别色谱与大多数其它物理和化学的分离方法的特征是两个互相不混溶的相接触，其中一个相是静止的，而另一个是流动的。引入流动相的样品混合物经历了一系列的相互作用，即静止相和流动相之间的分配，因为它被流动相携带通过系统。相互作用利用样品中各组分的物理或化学性质的差异。这些差异在穿过包含静止相的柱的流动相的影响下控制各个组分的迁移率。分离的组分以一定的顺序出现，这取决于它们与静止相的相互作用。最少延迟的组分首先洗脱，最强烈保留的材料最后洗脱。随着样品组分从柱洗脱，当一个组分被延迟足以防止与相邻溶质的区带重叠时获得分离。

最常见的色谱类型之一是尺寸排阻色谱(SEC)。预填充的SEC柱常用于蛋白制备和纯化领域。然而，对于许多色谱产品，仍有希望改进流动性质，同时维持分辨率。对于SEC分离，还存在关于这些分离与其它液相色谱技术像离子交换或亲和力色谱比较通常是相当慢的问题。

发明概述

本发明的目的是提供一种生产色谱介质的方法，其提供与现有技术比较具有改变的性质的介质。

在第一方面，本发明提供一种生产色谱介质的方法，其用包含与孔内和珠表面上的葡聚糖偶联的多孔珠的色谱介质起始，包括使色谱介质经历葡聚糖酶处理的步骤。

优选地，葡聚糖酶被偶联于支持粒子。在一个实施方案中，支持分子大于要处理的色谱介质的孔。在这种情况下，葡聚糖酶不能进入孔，只有珠外面的葡聚糖将被处理/除去。

支持粒子或分子可以是天然或合成的色谱珠或PEG (聚乙二醇)或合适大小的任何其它分子或粒子。

在一个实施方案中，支持粒子是磁性的，优选磁性色谱珠。

在本发明的另一个实施方案中，葡聚糖酶偶联的支持粒子可进入色谱介质的孔。在这种情况下，不仅所述珠表面上的葡聚糖，而且孔内的葡聚糖也将被葡聚糖酶处理。

色谱介质优选地由天然或合成的树脂制得。一些非限制性实例是纤维素、琼脂糖、壳聚糖、二氧化硅(多孔玻璃)、氧化铝、聚苯乙烯、聚丙烯酸酯：即聚甲基丙烯酸酯、聚乙烯醚(polyvinyleters)、聚丙烯酰胺、聚乙二醇、聚烯烃：即聚乙烯、聚丙烯、聚酯：即聚二醇、聚丙交酯。

在优选的实施方案中，色谱介质由琼脂糖制得，优选琼脂糖是交联的。

在进一步的实施方案中，偶联于色谱介质的葡聚糖具有配体，例如离子交换、亲和力、疏水相互作用或多模式配体。在这个实施方案中，在所述珠表面上的葡聚糖偶联配体将通过葡聚糖酶处理去除，但如果支持粒子足够大而不能进入孔，则附接于孔内的葡聚糖的配体将保持完整。这样，可生产具有无活性的外表面和具有活性配体的内核的色谱介质。

在第二方面，本发明涉及依据以上方法生产的色谱介质。在优选的实施方案中，所述珠由交联的琼脂糖制得，且葡聚糖没有任何配体。这在实施例中描述并将提供具有改进的流动性质的新型SEC介质。

附图简述

图1是用PEG化葡聚糖酶处理含葡聚糖的色谱珠的示意图；

图2显示葡聚糖酶处理之前、期间和之后的色谱珠；

图3是具有处理前(未处理的珠)和处理后的珠的填充柱的示意图；和