[发明专利]用于特异性转变靶向DNA序列的核酸碱基的基因组序列的修饰方法、及其使用的分子复合体

权利要求书

1.修饰宿主细胞内的双链DNA的靶向位点的方法，其包括通过将为

(a)编码包含与选择的双链DNA中的靶核苷酸序列的目标链互补的序列的crRNA的DNA、和

(b)编码构成Cascade的蛋白质组合和核酸碱基转变酶的DNA，且被构成该核酸碱基转变酶可与该蛋白质组合中的任一种蛋白质形成复合体的形态的DNA

导入该宿主细胞，在该靶向位点中不切割该双链DNA链，而使该靶向位点的1个以上的核苷酸缺失或转变为其它的1个以上的核苷酸，或者向该靶向位点插入1个以上的核苷酸的步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述构成Cascade的蛋白质组合为CasA、CasB、CasC、CasD及CasE。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述Cascade源自大肠杆菌。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其中，与所述核酸碱基转变酶形成复合体的蛋白质为CasE。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，所述核酸碱基转变酶为脱氨酶。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述脱氨酶为胞苷脱氨酶。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，所述宿主细胞为原核生物细胞。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其包括：将以能够控制表达时期的形式包含有所述(a)及(b)的DNA的表达载体导入所述宿主细胞，以及为了固定双链DNA的靶位点的修饰所必须的时期，诱导该DNA的表达的步骤。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，双链DNA中的靶核苷酸序列存在对于宿主细胞必需的基因内。

10.核酸修饰酶复合体，其为用于修饰宿主细胞内的双链DNA的靶向位点的核酸修饰酶复合体，其含有：

(a)包含与选择的双链DNA中的靶核苷酸序列的目标链互补的序列的crRNA、和

(b)构成Cascade的蛋白质组合、和与该蛋白质组合中的任一种蛋白质形成复合体的核酸碱基转变酶。

11.编码权利要求10所述的核酸修饰酶复合体的DNA。