[发明专利]纳米囊泡的多重表型分析

权利要求书

1.一种用于从受试者内的生物样品中确定细胞外囊泡上生物标志物的存在的测定法，所述测定法包括以下步骤：

(a)使SP-IRIS即单粒子干涉反射成像传感器与生物样品接触，所述SP-IRIS传感器包含第一探针，所述生物样品包含至少一种细胞外囊泡，从而将所述至少一种细胞外囊泡捕获至所述传感器上；

(b)使用SP-IRIS系统对所述传感器进行成像以对结合的细胞外囊泡进行定量和单独表征；

(c)使所述传感器与缀合至标记的第二探针接触，所述第二探针包含二级识别探针，所述二级识别探针与细胞外囊泡上或细胞外囊泡内部的生物标志物结合；以及

(d)使用SP-IRIS系统对所述传感器进行成像并将图像与步骤(b)中获得的图像进行比较，其中，与步骤(b)中所成像的信号相比，步骤(d)中所成像的信号的变化表示在所述至少一种细胞外囊泡上存在所述生物标志物。

2.如权利要求1所述的测定法，其中，所述至少一种细胞外囊泡包括外泌体。

3.如权利要求1所述的测定法，其中，所述第一探针和/或所述第二探针包括抗体。

4.如权利要求1所述的测定法，其中，所述生物样品包括从受试者获得的样品。

5.如权利要求4所述的测定法，其中，所述从受试者获得的样品包括血液样品。

6.如权利要求1所述的测定法，其中，所述第一探针包括抗CD63抗体。

7.如权利要求1所述的测定法，其中，所述第一探针和/或所述第二探针包括针对生物标志物的抗体。

8.如权利要求1所述的测定法，其中，所述标记包括纳米粒子、荧光部分或量子点。

9.如权利要求8所述的测定法，其中，所述纳米粒子包括金粒子。

10.如权利要求1所述的测定法，其中，捕获的细胞外囊泡通过大小和/或形状进行表征。

11.如权利要求1所述的测定法，其中，所述传感器进一步包含多种不同的细胞外囊泡特异性抗体，以用于进行多重检测。

12.如权利要求11所述的测定法，其中，所述多种不同的细胞外囊泡特异性抗体包含至少5种不同的细胞外囊泡特异性抗体。

13.如权利要求1所述的测定法，其中，所述生物标志物为外泌体内生物标志物。

14.如权利要求1所述的测定法，其中，所述生物标志物为外泌体外生物标志物。

15.如权利要求1所述的测定法，其中，在步骤(c)中使用多种二级探针。

16.如权利要求15所述的测定法，其中，所述多种二级探针是差异化标记的。

17.如权利要求16所述的测定法，其中，所述多种二级探针是用通过大小和/或形状区分的多种纳米粒子进行差异化标记的。

18.一种用于对群体中表达生物标志物的细胞外囊泡进行定量和/或表征的方法，所述方法包括：

(a)使包含至少一种细胞外囊泡的生物样品与一种或多种差异化标记的探针接触，所述探针结合一种或多种生物标志物；

(b)使SP-IRIS即单粒子干涉反射成像传感器与步骤(a)中的标记的生物样品接触，所述SP-IRIS传感器包含细胞外囊泡特异性探针，从而将细胞外囊泡群从步骤(a)中的所述标记的生物样品中捕获至所述传感器上；

(c)使用SP-IRIS系统对步骤(b)中的捕获的细胞外囊泡进行成像，从而对所述生物样品中的细胞外囊泡进行定量和/或表征；

(d)使用SP-IRIS系统对所述一种或多种差异化标记的探针进行成像，从而对所述生物样品中经所述一种或多种差异化标记的探针标记的细胞外囊泡进行定量和/或表征；以及

(e)将步骤(d)中获得的图像与步骤(c)中获得的图像进行比较，以对步骤(b)中捕获的细胞外囊泡群中表达所述一种或多种生物标志物的细胞外囊泡进行定量和/或表征。