[发明专利]真菌产生FDCA

权利要求书

1.一种真菌细胞，其包含以下至少一种的遗传修饰：

a)与缺乏遗传修饰的相应野生型细胞相比，赋予细胞将5-羟甲基-2-呋喃羧酸(HMFCA)氧化成5-甲酰-2-糠酸(FFCA)的能力、或增加细胞中将HMFCA氧化成FFCA的酶的比活性的遗传修饰；和，

b)与缺乏遗传修饰的相应野生型细胞相比，降低或消除参与2,5-呋喃二羧酸分解代谢的酶的比活性的遗传修饰。

2.权利要求1的真菌细胞，其中所述细胞还包含：

c)与缺乏遗传修饰的相应野生型细胞相比，赋予细胞将呋喃醛氧化成相应呋喃羧酸的能力的遗传修饰，或增加细胞中将呋喃醛氧化成相应呋喃羧酸的酶的比活性的遗传修饰。

3.权利要求1或2的真菌细胞，其中：

a)a)中的遗传修饰是以下至少一种：

i)增加编码具有HMFCA脱氢酶活性的多肽的核苷酸序列的表达的修饰，所述多肽包含与SEQ ID NO.1-4中的至少一个的氨基酸序列具有至少45％序列相同性的氨基酸序列；和，

ii)增加编码具有呋喃氧化酶活性的多肽的核苷酸序列的表达的修饰，所述多肽包含与SEQ ID NO.7-9中的至少一个的氨基酸序列具有至少45％序列相同性的氨基酸序列；

b)b)中的遗传修饰是降低或消除以下至少一种的表达的修饰：

i)编码FDCA脱羧单加氧酶的基因，其中优选地所述基因是编码与SEQ ID NO：10和11中的至少一个具有至少45％序列相同性的氨基酸序列的基因；

ii)编码FDCA脱羧酶的基因，其中优选地所述基因是编码与SEQ ID NO：12具有至少45％序列相同性的氨基酸序列的基因；

iii)编码FDCA脱羧脱氢酶的基因，其中优选地所述基因是编码与SEQ ID NO：13具有至少45％序列相同性的氨基酸序列的基因；和，

iv)编码内酯酶的基因，所述内酯酶水解由FDCA脱羧导致的内酯，其中优选地所述基因是编码与SEQ ID NO：14具有至少45％序列相同性的氨基酸序列的基因。

4.权利要求1-3任一项的真菌细胞，其中c)中的遗传修饰是增加编码具有呋喃醛脱氢酶活性的多肽的核苷酸序列的表达的修饰，所述醛脱氢酶具有以下能力中的至少一种：i)将HMF氧化成HMFCA，ii)将DFF氧化成FFCA，和iii)将FFCA氧化成FDCA，所述多肽包含与SEQID NO：5和6中至少一个的氨基酸序列具有至少45％序列相同性的氨基酸序列。

5.权利要求1至4任一项的细胞，其中所述细胞还包含选自以下的遗传修饰：

a)降低或消除编码将HMF和/或FFCA还原成相应醇的短链脱氢酶的基因的表达的遗传修饰，其中优选地所述基因是编码包含与SEQ ID NO：15具有至少45％序列相同性的氨基酸序列的多肽的基因和编码包含与SEQ ID NO：69具有至少45％序列相同性的氨基酸序列的多肽的基因的至少一个；

b)增加编码转运至少一种呋喃化合物的多肽的核苷酸序列的表达的遗传修饰，所述多肽优选地包含与SEQ ID NO：16-18中的至少一个的氨基酸序列具有至少45％序列相同性的氨基酸序列；和，

c)改变编码参与呋喃分解代谢的基因的转录激活物的基因表达的遗传修饰，其中优选地所述基因是编码包含与SEQ ID NO：19具有至少45％序列相同性的氨基酸序列的多肽的基因。