[发明专利]通过遗传编程的多谱系造血前体细胞产生

权利要求书

1.一种用于从多能干细胞产生造血前体细胞的体外方法，包括：

(a)提供包含至少一种编码造血前体编程基因的表达构建体的多能干细胞(PSC)，其中所述造血前体编程基因包括ETS/ERG基因、GATA2和HOXA9；和

(b)在使得造血前体编程基因表达的条件下培养所述多能干细胞，从而产生造血前体细胞(HPC)。

2.权利要求1的方法，其中所述HPC能够分化成髓样和淋巴样谱系。

3.权利要求1的方法，还包括(c)在使得所述造血前体编程基因不表达的条件下培养所述HPC。

4.权利要求1的方法，其中所述表达构建体是基于转座子或游离体的表达构建体。

5.权利要求1的方法，其中所述造血前体编程基因处于单个启动子的控制下。

6.权利要求5的方法，其中所述单个启动子是诱导型启动子。

7.权利要求6的方法，其中所述诱导型启动子是四环素诱导型启动子。

8.权利要求1的方法，其中步骤(b)的培养是约四天至约十天。

9.权利要求1的方法，其中所述多能干细胞是胚胎干细胞(ESC)或诱导的多能干细胞(iPSC)。

10.权利要求1的方法，其中所述多能干细胞是人的。

11.权利要求1的方法，其中所述HPC表达一种或多种造血前体标记。

12.权利要求11的方法，其中所述造血前体标记选自CD43，CD33，CD34，CD45，CD235a和CD41a。

13.权利要求11的方法，其中所述一种或多种造血前体标记选自CD43，CD45和CD34。

14.权利要求1的方法，其中所述HPC是未成熟的HPC。

15.权利要求14的方法，其中所述未成熟的HPC表达CD34和CD43。

16.权利要求14的方法，其中至少50％的HPC是未成熟的HPC。

17.权利要求14的方法，其中至少70％的HPC是未成熟的HPC。

18.权利要求14的方法，其中至少90％的HPC是未成熟的HPC。

19.权利要求3的方法，其中所述HPC在不存在基质细胞的情况下培养。

20.权利要求3的方法，其中所述HPC在无血清或确定的培养基中培养。

21.权利要求19或权利要求20的方法，其中所述HPC可以分化成选自以下的两种或更多种细胞类型：浆细胞，天然杀伤细胞，巨噬细胞，肥大细胞，巨核细胞，红细胞，粒细胞，淋巴细胞，单核细胞，白细胞和血小板。

22.权利要求21的方法，其中所述淋巴细胞是B淋巴细胞和/或T淋巴细胞。

23.权利要求1的方法，其中所述ETS/ERG基因是ERG(v-ets成红细胞增多症病毒E26癌基因同源物)，ETV2(ets变体2)，FLI-1(Friend白血病病毒整合1)，ELK3(含ETS结构域的蛋白)，ETS1(C-ets-1)或ETS2(C-ets-2)。