[发明专利]检测裂解的高分子量激肽原的免疫测定方法

权利要求书

1.特异性结合裂解的高分子量激肽原(HMWK)的第一试剂和结合HMWK的第二试剂在制造用于检测裂解的HMWK的免疫测定试剂中的用途，所述检测包括：

(i)提供支持构件，在所述支持构件上固定特异性结合裂解的HMWK的第一试剂；

(ii)使(i)的所述支持构件与疑似含有裂解的HMWK的生物样品接触；

(iii)使(ii)中获得的支持构件与结合HMWK的第二试剂接触，其中所述第二试剂缀合至标记物；和

(iv)直接或间接检测从结合至所述支持构件的第二试剂的标记物释放的信号，以确定所述生物样品中所述裂解的HMWK的水平；

其中所述第一试剂为抗体，所述抗体包括重链互补决定区(CDR)1序列FSFYVMV、重链CDR2序列GISPSGGNTAYADSVK和重链CDR3序列KLFYYDDTKGYFDF；和轻链CDR1序列SGSSSNIGSNYVY、轻链CDR2序列RNNQRPS和轻链CDR3序列AWDDSLNGRV。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述抗体包括以SEQ ID NO:4所示的重链可变区序列与以SEQ ID NO:5所示的轻链可变区序列。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的用途，其中所述支持构件是96孔板。

4.根据权利要求1或权利要求2所述的用途，其中在步骤(ii)之前，将所述(i)的支持构件用封闭缓冲液培养。

5.根据权利要求1或权利要求2所述的用途，其中所述第二试剂是结合至HMWK的多克隆抗体、单克隆抗体或两种或更多种单克隆抗体的混合物。

6.根据权利要求1或权利要求2所述的用途，其中所述标记物是信号释放剂。

7.根据权利要求1或权利要求2所述的用途，其中所述标记物是受体-配体对的一个成员，并且所述检测还包括在步骤(iv)之前，使结合至所述支持构件的(iii)中的所述第二试剂与所述受体-配体对的另一成员接触，其中所述另一成员缀合至信号释放剂。

8.根据权利要求7所述的用途，其中所述受体-配体对是生物素和链霉亲和素。

9.根据权利要求1或权利要求2所述的用途，其中所述检测使用Western印迹测定法、ELISA测定法或侧向流测定法进行。

10.根据权利要求1或权利要求2所述的用途，其中在ZnCl₂的存在下进行步骤(ii)。

11.根据权利要求1或权利要求2所述的用途，其中所述生物样品从人受试者获得。

12.根据权利要求11所述的用途，其中所述生物样品是血清样品或血浆样品，所述血清样品或血浆样品从在包含一种或多种蛋白酶抑制剂的真空血液收集管中收集的血液样品处理。

13.根据权利要求11所述的用途，其中所述人受试者具有疾病，并且其中所述检测还包括基于步骤(iv)中确定的所述裂解的HMWK的水平确定所述疾病是否由血浆激肽释放酶(pKal)介导，所述生物样品中所述裂解的HMWK的水平与对照样品中所述裂解的HMWK的水平的偏差表示所述疾病由pKal介导。

14.根据权利要求11所述的用途，还包括基于步骤(iv)中确定的所述裂解的HMWK的水平，确定所述人受试者是否具有由血浆激肽释放酶介导的疾病或处于由血浆激肽释放酶介导的疾病的风险中，其中如果来自所述受试者的所述生物样品的所述裂解的HMWK的水平偏离对照样品的所述裂解的HMWK的水平，则所述受试者被鉴定为具有所述疾病或处于具有所述疾病的风险中。