[发明专利]鉴定神经肌肉接头活动的调节剂的体外方法

权利要求书

1.一种包含体外神经肌肉接头的组合物，所述体外神经肌肉接头包含人运动神经元、人骨骼肌和非神经元细胞的共培养物，所述非神经元细胞在所述人骨骼肌收缩时将所述人骨骼肌保持在适当位置，其中所述人运动神经元包含人多能干细胞(PSC)-衍生的脊髓运动神经元，其中所述人PSC-衍生的脊髓运动神经元通过使人PSC与有效量的至少一种SmallMothers Against Decapentaplegic(SMAD)抑制剂、至少一种腹面发育因子和至少一种尾端化因子接触而分化，并且其中所述人骨骼肌包含人成肌细胞-衍生的骨骼肌或人PSC-衍生的骨骼肌。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述神经肌肉接头包含人PSC-衍生的骨骼肌。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述运动神经元表达可检测水平的同源框基因9(HB9)、神经丝标志物SMI32、胰岛因子1(ISL1)、同源框转录因子NKX6.1、少突胶质细胞转录因子2(OLIG2)、胆碱乙酰基转移酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(ACHE)和集聚蛋白中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述至少一种SMAD抑制剂选自转化生长因子β(TGFβ)/激活素-Nodal信号传导抑制剂和骨形态生成蛋白(BMP)信号传导抑制剂。

5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述TGFβ/激活素-Nodal信号传导抑制剂是SB431542。

6.根据权利要求4所述的组合物，其中所述BMP信号传导抑制剂是LDN193189。

7.根据权利要求1所述的组合物，其中所述至少一种腹面发育因子包含刺猬因子通路的激活剂。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述刺猬因子通路的激活剂选自音猬因子(SHH)、purmorphamine、及其组合。

9.根据权利要求1所述的组合物，其中所述至少一种尾端化因子选自视黄酸(RA)、无翅活化因子、及其组合。

10.根据权利要求1所述的组合物，其中所述运动神经元表达光敏蛋白。

11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述光敏蛋白包含光门控离子通道。

12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述光门控离子通道选自视紫红质、视紫红质通道蛋白、盐细菌视紫红质、古紫质、细菌视紫红质、变形菌视紫质、其衍生物、及其组合。

13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述视紫红质通道蛋白是视紫红质通道蛋白-2。

14.根据权利要求1所述的组合物，其中所述人运动神经元和人骨骼肌衍生自从诊断患有ALS、重症肌无力、或恶病质的受试者中分离的细胞，或衍生自从处于患有ALS、重症肌无力、或恶病质的风险的受试者中分离的细胞。

15.根据权利要求1所述的组合物，其中所述人运动神经元和人骨骼肌在来自重症肌无力患者的免疫球蛋白存在下共培养，其中所述免疫球蛋白包含针对所述患者的神经肌肉接头中蛋白质的自身抗体。

16.根据权利要求1所述的组合物，其中所述人运动神经元和人骨骼肌在来自诊断患有恶病质或处于患有恶病质风险的受试者的血液、血清和/或血浆存在下共培养。

17.根据权利要求1所述的组合物，其中所述人运动神经元和人骨骼肌在蛋白水解因子和/或炎性细胞因子存在下共培养。