[发明专利]多重基因组编辑

权利要求书

1.一种使细胞中一个或多个靶核酸序列的表达失活的方法，其包括：

向细胞导入一个或多个核糖核酸(RNA)序列和编码Cas蛋白的核酸序列，所述RNA序列包含与所述一个或多个靶核酸序列中各靶核酸序列的全部或部分互补的部分；并且

将所述细胞维持在这样的条件下，其中，Cas蛋白在所述条件下表达，并且所述Cas蛋白结合所述细胞中的一个或多个靶核酸序列并使所述一个或多个靶核酸序列失活。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述导入步骤包括用所述一个或多个RNA序列以及所述编码Cas蛋白的核酸序列转染所述细胞。

3.如权利要求1所述的方法，其中，将所述一个或多个RNA序列、所述编码Cas蛋白的核酸序列、或其组合导入所述细胞的基因组中。

4.如权利要求1所述的方法，其中，所述Cas蛋白的表达是诱导型的。

5.如权利要求1所述的方法，其中，所述细胞来自胚胎。

6.如权利要求1所述的方法，其中，所述细胞是干细胞、受精卵、或生殖细胞。

7.如权利要求6所述的方法，其中，所述干细胞是胚胎干细胞或多能干细胞。

8.如权利要求1所述的方法，其中，所述细胞是体细胞。

9.如权利要求8所述的方法，其中，所述体细胞是真核细胞。

10.如权利要求9所述的方法，其中，所述真核细胞是动物细胞。

11.如权利要求10所述的方法，其中，所述动物细胞是猪细胞。

12.如权利要求1所述的方法，其中，所述一个或多个靶核酸序列包括猪内源性逆转录病毒(PERV)基因。

13.如权利要求12所述的方法，其中，所述PERV基因包括pol基因。

14.如权利要求13所述的方法，其中，所述pol基因的一个或多个拷贝被灭活。

15.如权利要求14所述的方法，其中，所述细胞中的所述pol基因的全部拷贝被灭活。

16.如权利要求1所述的方法，其中，所述Cas蛋白是Cas9。

17.如权利要求1所述的方法，其中，所述一个或多个RNA序列是约10-约1000个核苷酸。

18.如权利要求1所述的方法，其中，所述一个或多个RNA序列是约15-约200个核苷酸。

19.一种调节细胞中一个或多个靶核酸序列的方法，其包括：

向所述细胞导入核酸序列，所述核酸序列编码与所述细胞中靶核酸序列的全部或部分互补的RNA；

向所述细胞导入编码酶的核酸序列，所述酶与所述RNA相互作用并且以位点特异性方式切割所述靶核酸序列；并且

将所述细胞维持在这样的条件下，在所述条件下RNA结合互补靶核酸序列，形成复合物，并且

其中，所述酶结合所述复合物上的结合位点，并且调节所述一个或多个靶核酸序列。

20.如权利要求19所述的方法，其中各导入步骤包括用所述核酸序列转染所述细胞。

21.如权利要求19所述的方法，其中，将编码所述RNA的核酸序列、编码Cas蛋白的核酸序列、或其组合导入所述细胞的基因组中。