[发明专利]用于生产疫苗的化学限定无血清培养基中的MDCK悬浮细胞系

权利要求书

1.包含改良的马丁达比狗肾(MDCK)细胞和生长培养基的组合物，所述生长培养基包含化学限定的且无动物成分的培养基，其中，所述改良的MDCK细胞处于悬浮培养物中无需微载体。

2.如权利要求1所述的组合物，其中，所述改良的MDCK细胞具有约30小时至约35小时的平均倍增时间。

3.如权利要求1或2所述的组合物，其中，所述改良的MDCK细胞适于生产疫苗用病毒。

4.如权利要求3所述的组合物，其中，所述病毒维持抗原性。

5.如权利要求3或4所述的组合物，其中，所述病毒是流感病毒。

6.如上述权利要求中任一项所述的组合物，其中，所述改良的MDCK细胞在培养过程中无需更换培养基。

7.如权利要求1或2所述的组合物，其中，所述改良的MDCK细胞是保藏在Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikro-organismen und Zell kulturen GmbH的保藏号为---的细胞。

8.在无需微载体的条件下以悬浮形式培养改良的马丁达比狗肾(MDCK)细胞的方法，所述方法包括：使所述改良的MDCK细胞与化学限定的且无动物成分的生长培养基接触，其中，所述改良的MDCK细胞能够以悬浮培养物的形式在无需微载体的条件下生长，并且所述改良的MDCK细胞能够在5％CO₂条件下生长。

9.如权利要求8所述的方法，其中，所述改良的MDCK细胞具有约30小时至约35小时的平均倍增时间。

10.如权利要求8或9所述的方法，其中，所述改良的MDCK细胞适于生产人疫苗用病毒。

11.如权利要求10所述的方法，其中，所述病毒维持抗原性。

12.如权利要求10或11所述的方法，其中，所述病毒是流感病毒。

13.如权利要求8-12中任一项所述的方法，其中，所述改良的MDCK细胞在培养过程中无需更换培养基。

14.用于在改良的马丁达比狗肾(MDCK)细胞中生产疫苗生产用病毒的方法，所述改良的MDCK细胞能够在无需微载体的条件下以悬浮形式培养，所述方法包括使所述改良的MDCK细胞与化学限定的且无动物成分的生长培养基接触，采用病毒感染细胞以及收获所述病毒。

15.如权利要求14所述的方法，其中，不向所述培养基中加入额外的葡萄糖。

16.如权利要求14或15所述的方法，其中，所述改良的MDCK细胞是保藏在Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikro-organismen und Zellkulturen GmbH的保藏号为---的细胞。

17.生产马丁达比狗肾(MDCK)细胞的方法，所述MDCK细胞能够在无需微载体的条件下在化学限定无血清培养基中以悬浮形式培养，所述方法包括:

a)提供贴壁MDCK细胞；

b)在含有血清的生长培养基中、在搅动的生物反应器中并在不存在微载体的条件下培养所述贴壁MDCK细胞持续一段足以使MDCK细胞适应悬浮培养的时间段；

c)在化学限定无血清培养基中以悬浮培养物的形式培养悬浮-适应的MDCK细胞，从而提供能够在无需微载体的条件下在化学限定无血清培养基中以悬浮形式培养的MDCK细胞。