[发明专利]线粒体DNA的定量及确定胚胎质量的方法

权利要求书

1.一种用於确定胚胎中线粒体DNA相对数量的方法，其特征在于，所述方法包括

提供从所述胚胎获得的DNA样品；

确定所述DNA样品中线粒体DNA(mtDNA)的量；

确定所述DNA样品中参考DNA的量；以及

将所述mtDNA的量与所述参考DNA的量进行比较以确定所述胚胎中mtDNA的相对数量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胚胎中所述mtDNA的对量表示所述胚胎的植入潜力。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，使用定量PCR来执行确定所述DNA样品中所述mtDNA的量和确定所述DNA样品中所述参考DNA的量。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述定量PCR包括实时PCR。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，从植入所述胚胎1、2、3、4、5、6或7天后，或受精1-3天、2-4天、3-5天、5-7天、1-7天、或4-7天后得DNA样品。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胚胎是整倍体胚胎。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，确定所述DNA样品中所述mtDNA的量包括通过使所述DNA样品与包括靶向转录16S的序列的SEQ ID NO：2和3的引物对接触以产生16S扩增子来扩增mtDNA，或者使所述DNA样品与包括靶向编码NADH-泛醌氧化还原酶链4(MT-ND4)的序列的SEQ ID NO：8和9的引物对接触以产生MT-ND4扩增子。

8.如权利要求7所述的方法，还包括通过使所述DNA样品与包括SEQ ID NO：4的探针接触来检测所述16S扩增子。

9.如权利要求7所述的方法，还包括通过使所述DNA样品与包括SEQ ID NO：10的探针接触来检测所述MT-ND4扩增子。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述确定所述DNA样品中所述参考DNA的量包括通过使所述DNA样品与包括靶向Alu序列的SEQ ID NO：5和6的引物对接触以产生Alu扩增子来扩增参考DNA序列。

11.如权利要求10所述的方法，还包括通过使所述DNA样品与包括SEQ ID NO：7的探针接触来检测所述Alu扩增子。

12.如权利要求1所述的方法，还包括：

将所述整倍体胚胎中所述mtDNA的相对数量与植入潜力阈值进行比较；

其中，所述胚胎中的mtDNA的相对数量低于所述植入潜力阈值表示所述整倍体胚胎的有利植入潜力，以及所述胚胎中的mtDNA的相对数量超过所述植入潜力阈值表示所述整倍体胚胎的不利植入潜力。

13.一种用于选择胚胎进行植入的方法，其特征在于，所述方法包括：

确定所述胚胎样品中与所述胚胎中的参考核酸序列相比的线粒体DNA的相对量，其中，确定包括制备反应混合物，所述反应混合物包括：

i)来自所述胚胎的核酸样品；

ii)指向第一线粒体DNA序列的第一寡核甘酸引物对；以及

iii)指向参考靶核酸序列的参考寡核甘酸引物对；

扩增所述反应混合物以产生第一线粒体DNA序列产物和参考靶核酸序列产物；

与所述扩增的参考靶核酸序列产物的量比较以评估所述扩增的第一线粒体DNA序列产物的量；以及

当所述扩增的第一线粒体DNA序列产物相对于所述扩增的参考靶核酸序列产物的测量量低于植入潜力阈值时，选择胚胎进行植入。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述反应混合物还包括指向第二线粒体DNA序列的第二合成寡核甘酸引物对。