[发明专利]通过遗传互补对人源化肾脏的工程改造

权利要求书

1.一种包含非人类胚胎的嵌合胚胎，具有至少一种人类细胞，其中所述非人类胚胎中负责一种或多种内源器官或组织发育的一个或多个内源基因的两个等位基因都是被破坏的，其中所述人类细胞中负责相应的一种或多种人类器官或组织发育的一个或多个基因补充被破坏的一个或多个内源基因的功能，以便从所述嵌合胚胎发育的动物包括至少一种人类器官或组织，其中所述内源基因包括Pax2和/或Pax8，所述人类器官或组织包含人类肾脏细胞。

2.根据权利要求1所述的嵌合胚胎，其中所述非人类胚胎是非人类脊椎动物胚胎。

3.根据权利要求2所述的嵌合胚胎，其中所述非人类脊椎动物胚胎是偶蹄目动物胚胎或非人类灵长目动物胚胎。

4.根据权利要求2所述的嵌合胚胎，其中所述非人类脊椎动物胚胎选自由牛、马、猪、绵羊、鸡、鸟、兔、山羊、狗、猫、实验室动物、甲壳类动物和鱼组成的组。

5.根据权利要求2所述的嵌合胚胎，其中所述非人类脊椎动物胚胎是母牛、猪、绵羊、山羊、鸡或兔的胚胎。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的嵌合胚胎，其中非人类胚胎中负责一种或多种内源器官或组织发育的一个或多个内源基因已经通过转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)、成簇的规律性间隔短回文重复序列(CRISPR)、CRISPR相关蛋白9(Cas9)、锌指核酸酶(ZFN)、分子编码位点特异性内切酶、人工合成染色体、RecA-gal4融合、RNAi、CRISPRi或它们的组合被破坏。

7.根据权利要求6所述的嵌合胚胎，其中所述一个或多个内源基因已经通过Cas9被破坏。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的嵌合胚胎，其中所述人类细胞源自至少一种供体细胞，所述至少一种供体细胞是胚胎干细胞、组织特异性干细胞、间充质干细胞、多能干细胞或诱导多能干细胞。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的嵌合胚胎，其中所述破坏包括基因编辑，敲除，一个或多个DNA残基的插入，一个或多个碱基的缺失，或一个或多个DNA残基的插入和缺失。

10.根据权利要求1～8中任一项所述的嵌合胚胎，其中所述破坏包括一个或多个DNA残基的取代。

11.根据权利要求10所述的嵌合胚胎，其中所述破坏由一个或多个DNA残基的取代组成。

12.一种从根据权利要求1～11中任一项所述的嵌合胚胎发育的动物。

13.一种从根据权利要求1～12任一项所述的嵌合胚胎发育的动物收获的人类组织或器官。

14.一种产生嵌合胚胎的方法，包括：

a)破坏至少一个非人类细胞或非人类胚胎中负责一种或多种器官或组织发育的一个或多个内源基因的两个等位基因；

b)如果步骤a)是对非人类细胞进行的，则克隆该细胞以产生胚胎；和

c)将至少一种人类细胞引入步骤a)或步骤b)的胚胎中，其中所述人类细胞携带负责所述一种或多种器官或组织发育的一个或多个基因，从而产生嵌合胚胎，其中所述内源基因包括Pax2和/或Pax8，所述人类器官或组织包含人类肾脏细胞。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述非人类胚胎是非人类脊椎动物胚胎。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述非人类脊椎动物胚胎是偶蹄目动物胚胎或非人类灵长目动物胚胎。

17.根据权利要求15所述的方法，其中所述非人类脊椎动物胚胎选自由牛、马、猪、绵羊、鸡、鸟、兔、山羊、狗、猫、实验室动物和鱼组成的组。