[发明专利]用于基因编辑的演化的CAS9蛋白

权利要求书

1.重组Cas9蛋白，其包含与如SEQ ID NO:9-262中任一项提供的Cas9的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，

其中所述Cas蛋白的氨基酸序列包含选自下组的氨基酸残基中的至少一个，至少两个，至少三个，至少四个，至少五个，至少六个，或至少七个突变：SEQ ID NO:9中提供的氨基酸序列的氨基酸残基262、267、294、405、409、480、543、694、1219、1224、1256和1362，或SEQ IDNO:10-262中提供的氨基酸序列的任一项中的对应氨基酸残基，和

其中所述重组Cas9蛋白的氨基酸序列不与天然存在的Cas9蛋白的氨基酸序列相同。

2.权利要求1的Cas9蛋白，其包含与如SEQ ID NO:9-262中任一项提供的Cas9的氨基酸序列至少85％，至少90％，至少92％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或至少99.5％相同的氨基酸序列。

3.权利要求1的Cas9蛋白，其中所述Cas9蛋白包含RuvC和HNH结构域。

4.权利要求1的Cas9蛋白，其中所述Cas9蛋白的氨基酸序列包含选自下组的至少一个，至少两个，至少三个，至少四个，至少五个，至少六个，或至少七个突变：SEQ ID NO:9中提供的氨基酸序列的X262T、X267G、X294R、X405I、X409I、X480K、X543D、X694I、X1219V、X1224K和X1362P，或SEQ ID NO:10-262中提供的氨基酸序列的任一项中的对应突变，其中X表示任意氨基酸。

5.权利要求1的Cas9蛋白，其中所述Cas9蛋白的氨基酸序列包含选自下组的至少一个，至少两个，至少三个，至少四个，至少五个，至少六个，或至少七个突变：SEQ ID NO:9中提供的氨基酸序列的A262T、S267G、K294R、F405I、S409I、E480K、E543D、M694I、E1219V、N1224K、Q1256K、和L1362P，或SEQ ID NO:10-262中提供的氨基酸序列的任一项中的对应突变。

6.权利要求1的Cas9蛋白，其中所述Cas9蛋白的氨基酸序列包含SEQ ID NO:9中提供的氨基酸序列的X1219V突变，或SEQ ID NO:10-262中提供的氨基酸序列的任一项中的对应突变，其中X表示任意氨基酸。

7.权利要求1的Cas9蛋白，其中所述Cas9蛋白的氨基酸序列包含SEQ ID NO:9中提供的氨基酸序列的E1219V突变，或SEQ ID NO:10-262中提供的氨基酸序列的任一项中的对应突变。

8.权利要求1的Cas9蛋白，其中所述Cas9蛋白的氨基酸序列包含SEQ ID NO:9中提供的氨基酸序列的X294R突变，或SEQ ID NO:10-262中提供的氨基酸序列的任一项中的对应突变，其中X表示任意氨基酸。

9.权利要求1的Cas9蛋白，其中所述Cas9蛋白的氨基酸序列包含SEQ ID NO:9中提供的氨基酸序列的K294R突变，或SEQ ID NO:10-262中提供的氨基酸序列的任一项中的对应突变。

10.权利要求1的Cas9蛋白，其中所述Cas9蛋白的氨基酸序列包含SEQ ID NO:9中提供的氨基酸序列的X1256K突变，或SEQ ID NO:10-262中提供的氨基酸序列的任一项中的对应突变，其中X表示任意氨基酸。

11.权利要求1的Cas9蛋白，其中所述Cas9蛋白的氨基酸序列包含SEQ ID NO:9中提供的氨基酸序列的Q1256K突变，或SEQ ID NO:10-262中提供的氨基酸序列的任一项中的对应突变。